[發(fā)明專利]血清中腦部細(xì)胞來源的外泌體環(huán)狀RNA作為阿爾茲海默癥診斷標(biāo)志物的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110987488.1
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113774058B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁宏偉;渠爽;盧庚;甘文華;王馮娟
• 申請（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

本發(fā)明公開了血清中腦部細(xì)胞來源的外泌體環(huán)狀RNA作為阿爾茲海默癥診斷標(biāo)志物的應(yīng)用。檢測hsa_circ_0029426，hsa_circ_0044837中的任意一種或多種的試劑在制備阿爾茲海默癥輔助診斷試劑中的應(yīng)用。通過高通量測序和定量PCR在近100例患者中分析發(fā)現(xiàn)血清中的外泌體內(nèi)的2種環(huán)狀RNA可以有效的將阿爾茲海默癥患者從正常人和臨床癥狀與阿爾茲海默癥相似的非阿爾茲海默癥患者中區(qū)分開，ROC曲線下面積均大于0.90。因此，這2個環(huán)狀RNA或其組合均可作為檢測標(biāo)志物應(yīng)用于阿爾茲海默癥的診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，涉及與阿爾茲海默癥相關(guān)的外泌體內(nèi)環(huán)狀RNA標(biāo)志物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

阿爾茲海默癥(AD)是一種常見于老年人的神經(jīng)退行性疾病，其主要病理變化是大腦皮質(zhì)彌散性萎縮、神經(jīng)原纖維纏結(jié)和神經(jīng)細(xì)胞間大量老年斑形成等，以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶功能減退為其主要臨床癥狀。阿爾茲海默癥患病率和年齡相關(guān)，在85歲后老齡人群中患病率增長19％。受人口老齡化影響，阿爾茲海默癥患病人數(shù)不斷增長。AD診斷技術(shù)尚未成熟，產(chǎn)品種類較少，目前主流的產(chǎn)品集中在腦脊液中的β-淀粉樣蛋白、Tau蛋白標(biāo)志物中，但其中腦脊液樣本需要進(jìn)行腰椎穿刺，對于患者的損傷較大，使用率較低。

外泌體是具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)、直徑為30～100nm的微小囊泡。外泌體可以將包裹其內(nèi)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA等物質(zhì)特異性運輸?shù)桨屑?xì)胞調(diào)控靶細(xì)胞的功能，從而參與細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互調(diào)控。機體幾乎所有細(xì)胞都可產(chǎn)生外泌體。組成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞如星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元等在病理、生理刺激時亦可分泌外泌體。外泌體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，攜帶重要的生物活性分子，在神經(jīng)細(xì)胞間交流通訊發(fā)揮著重要的信使功能，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、創(chuàng)傷、炎癥感染、退行性疾病等發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷及治療起著重要的作用。中樞神經(jīng)系統(tǒng)分泌的外泌體被細(xì)胞分泌出來之后可以進(jìn)入血液中，這些血液中的外泌體可以反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)組成細(xì)胞的生理與病理狀態(tài)，因此其成為一種極具希望的潛在的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷的標(biāo)志物。在本發(fā)明中，我們研發(fā)了能夠從血液中分離腦部細(xì)胞來源外泌體的新方法，并且通過高通量測序和定量PCR技術(shù)鑒定了一組與阿爾茲海默癥相關(guān)的腦部細(xì)胞來源外泌體的環(huán)狀RNA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供與阿爾茲海默癥相關(guān)的外泌體環(huán)狀RNA標(biāo)志物或其組合。

本發(fā)明的另一目的是提供所述標(biāo)志物或其組合的應(yīng)用。

本發(fā)明的又一目的是提供檢測所述標(biāo)志物或其組合的試劑及其應(yīng)用。

本發(fā)明的目的可通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

與阿爾茲海默癥相關(guān)的外泌體環(huán)狀RNA標(biāo)志物或其組合,選自hsa_circ_0029426，hsa_circ_0044837中的任意一種或多種；hsa_circ_0029426的序列如SEQ?ID?NO.1所示，hsa_circ_0044837如SEQ?ID?NO.2所示。

本發(fā)明所述的外泌體環(huán)狀RNA標(biāo)志物或其組合在制備阿爾茲海默癥輔助診斷試劑中的應(yīng)用。

檢測本發(fā)明所述的外泌體環(huán)狀RNA標(biāo)志物或其組合的試劑在制備阿爾茲海默癥輔助診斷試劑中的應(yīng)用。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選，所述的試劑為PCR引物。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選，檢測hsa_circ_0029426的上游引物如SEQ?ID?NO.3所示，下游引物如SEQ?ID?NO.4所示，檢測hsa_circ_0044837的上游引物如SEQ?ID?NO.5所示，下游引物如SEQ?ID?NO.6所示。

一種阿爾茲海默癥輔助診斷試劑盒，包含檢測權(quán)利要求1所述的外泌體環(huán)狀RNA標(biāo)志物或其組合的試劑。