[發(fā)明專利]檢測蛋白抗原的微流控芯片、方法、試劑盒和系統(tǒng)

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• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113514646A
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程邦寧;李順基;劉筆鋒;錢純亙;肖育勁;陳鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;B01L3/00
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 張靈莉

1.一種蛋白抗原的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

將待測樣本與反應(yīng)試劑混合后，采用微流控技術(shù)將所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑的混合物制成多個液滴，其中，所述反應(yīng)試劑包括標記有標記物的抗體和電解質(zhì)提供劑，所述標記有標記物的抗體能與所述待測樣本中的蛋白抗原特異性結(jié)合而形成抗原-抗體復(fù)合物，在所述液滴中包裹有多個所述抗原-抗體復(fù)合物，多個所述抗原-抗體復(fù)合物能在所述電解質(zhì)提供劑的作用下發(fā)生凝集反應(yīng)；及

檢測、分析凝集反應(yīng)后各個所述液滴中凝集反應(yīng)對應(yīng)的信號的強度，以確定所述待測樣本中所述蛋白抗原的量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述標記物為膠乳微球，在所述檢測凝集反應(yīng)后各個所述液滴中凝集反應(yīng)對應(yīng)的信號的強度的步驟中，檢測的是各個所述液滴的濁度。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述標記物為聚集誘導(dǎo)發(fā)光材料，在所述檢測凝集反應(yīng)后各個所述液滴中凝集反應(yīng)對應(yīng)的信號的強度的步驟中，檢測的是各個所述液滴的發(fā)光強度。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，在所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑的混合物形成液滴之后，還包括檢測所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑形成的液滴的尺寸并根據(jù)所述尺寸篩選合格液滴的步驟。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述反應(yīng)試劑還包括可與所述標記物區(qū)分的熒光染料；所述檢測所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑形成的液滴的尺寸并根據(jù)所述尺寸篩選合格液滴的步驟包括：

檢測所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑形成的液滴的熒光分布情況；及

根據(jù)所述熒光分布情況篩選合格液滴。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為所述蛋白抗原的定量檢測方法，所述檢測方法還包括以下步驟：

將與所述待測樣本相同體積的所述蛋白抗原的標準樣本和所述反應(yīng)試劑混合后，采用微流控技術(shù)將所述標準樣本和所述反應(yīng)試劑的混合物制成多個液滴；

檢測并統(tǒng)計凝集反應(yīng)后所述標準樣本與所述反應(yīng)試劑形成的各個液滴中凝集反應(yīng)對應(yīng)的信號的強度，得到標準樣本的信號強度；

檢測凝集反應(yīng)后所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑形成的各個液滴中凝集反應(yīng)對應(yīng)的信號的強度，計算所述待測樣本與所述反應(yīng)試劑形成的各個液滴的信號強度總和，得到待測樣本的信號強度；及

根據(jù)所述標準樣本中所述蛋白抗原的濃度、所述標準樣本的信號強度和所述待測樣本的信號強度，計算待測樣本中蛋白抗原的濃度。

7.一種檢測蛋白抗原的微流控芯片，其特征在于，包括液滴形成組件和液滴流道；所述液滴形成組件用于將樣本與反應(yīng)試劑形成的混合物制成多個液滴，所述液滴形成組件包括第一相流道和試劑流道，所述第一相流道上設(shè)置有第一相加樣口和第一相出樣口，所述第一相加樣口與所述第一相出樣口均連通；所述試劑流道上設(shè)置有試劑加樣口和與所述試劑加樣口連通的試劑出樣口，所述試劑出樣口靠近所述第一相出樣口，以使經(jīng)所述試劑出樣口流出的溶液能被從所述第一相出樣口流出的第一相包裹而形成液滴。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片還包括篩選通道、檢測池和廢液池，所述篩選通道為三通管道，所述篩選通道的一端與所述液滴流道連通，所述篩選通道的其他兩端分別與檢測池和廢液池連通。

9.一種蛋白抗原的檢測試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求7或8所述的檢測蛋白抗原的微流控芯片和反應(yīng)試劑，所述反應(yīng)試劑包括標記有標記物的抗體和電解質(zhì)提供劑，所述標記有標記物的抗體能與待測樣本中的蛋白抗原特異性結(jié)合而形成抗原-抗體復(fù)合物，所述電解質(zhì)提供劑為多個所述抗原-抗體復(fù)合物發(fā)生凝集反應(yīng)提供條件。

10.一種蛋白抗原的檢測系統(tǒng)，其特征在于，包括：

權(quán)利要求7所述的微流控芯片；及

檢測組件，所述檢測組件用于檢測所述微流控芯片中凝集反應(yīng)后的液滴中凝集反應(yīng)對應(yīng)的信號強度。