[發(fā)明專利]一種組織工程生物支架的制備方法及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110986859.4
• 申請(qǐng)日: 2021-08-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113648461A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王友;苑志國(guó);呂卓誠(chéng);劉鑫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): A61L27/36
• 分類(lèi)號(hào): A61L27/36;A61L27/10;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/56
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩;張業(yè)民

1.一種組織工程生物支架，其特征在于：包括生物活性玻璃納米球和脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)；生物活性玻璃納米球和脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建為復(fù)合支架。

2.一種組織工程生物支架的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：利用溶膠凝膠法制備生物活性玻璃納米球，將一定量的蒸餾水和無(wú)水乙醇混合，加入氨水調(diào)節(jié)PH至堿性；加入正硅酸乙酯，快速攪拌，反應(yīng)30分鐘；加入四水硝酸鈣，反應(yīng)4小時(shí)；8000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，收集反應(yīng)產(chǎn)物，然后分離，用去離子水和無(wú)水乙醇洗滌2次；50℃烘箱過(guò)夜烘干，然后700℃馬弗爐中燒結(jié)，研磨后得到普通生物玻璃納米球；

步驟2：利用物理粉碎差速離心法制備脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)凝膠；取新鮮軟骨片若干，無(wú)菌蒸餾水洗凈后，反復(fù)凍融；將凍融若干次的軟骨片物理粉碎，直至打成漿料；

步驟3：將軟骨勻漿進(jìn)行差速離心，首先2000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘，去掉沉淀；然后6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘，去除沉淀，最后10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心30分鐘，去掉上清，下層即為脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)凝膠；

步驟4：將2000轉(zhuǎn)/分鐘離心后的沉淀進(jìn)行收集，再次用粉碎機(jī)進(jìn)行物理粉碎勻漿，重復(fù)步驟3，獲取脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)凝膠；將獲取的脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)凝膠凍干后粉碎，獲取脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)顆粒；

步驟5：生物活性玻璃納米球復(fù)合脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建復(fù)合支架；取適量生物活性玻璃納米球與脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)顆粒混合，質(zhì)量比為1-100/300，振蕩，以使二者混合充分、均勻；將混合后的生物活性玻璃納米球與脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)中加入無(wú)菌蒸餾水，配置成3-10％左右的混懸液，超聲振蕩；充分混勻后冷凍干燥，獲取海綿狀支架；利用EDC/NHS對(duì)海綿狀支架進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)，交聯(lián)后利用PBS緩沖液清洗；再次冷凍干燥后即為生物活性玻璃納米球/脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)復(fù)合支架。

3.如權(quán)利要求2所述的一種組織工程生物支架的制備方法，其特征在于：所述步驟1中加入不同離子的化合物，以獲得含有不同治療性離子的生物活性玻璃納米球。

4.如權(quán)利要求2所述的一種組織工程生物支架的制備方法，其特征在于：所述步驟3中保持無(wú)菌操作。

5.一種組織工程生物支架的用途，其特征在于：所述組織工程生物支架為生物活性玻璃納米球和脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建的復(fù)合支架。

6.一種組織工程生物支架在骨關(guān)節(jié)損傷組織修復(fù)重建上的用途，其特征在于：所述組織工程生物支架為生物活性玻璃納米球和脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建的復(fù)合支架。

7.一種組織工程生物支架在制備用于損傷組織修復(fù)重建的藥物或醫(yī)療器械上的用途，其特征在于：所述組織工程生物支架為生物活性玻璃納米球和脫細(xì)胞軟骨細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建的復(fù)合支架。