[發明專利]甲基磺酸乙酯離體誘變大蒜抗葉枯病突變體的方法

在審

• 申請號: 202110985409.3
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113575416A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 陳書霞;吳美騫;洪緣緣;孫銀輝
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H4/00
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 韓翎

1.甲基磺酸乙酯離體誘變大蒜抗葉枯病突變體的方法，其特征在于：方法為：

1)以大蒜莖盤為材料，以濃度為1％的甲基磺酸乙酯(EMS)為誘變劑，分別進行處理2、4、6、8、12h，通過萌發率以確定最佳誘變時間；

2)將未誘變和誘變過的大蒜莖盤分別接種在粗毒素體積分數分別為0、5％、10％、15％、20％、25％、30％的篩選培養基上進行培養，通過萌發率以確定最佳粗毒素篩選壓；

3)利用濃度為1％的EMS處理大蒜莖盤6h，將處理過的外植體接種在葉枯病病原菌粗毒素體積分數為30％的培養基上，篩選獲得具有抗病性的再生植株。

2.根據權利要求1所述的甲基磺酸乙酯離體誘變大蒜抗葉枯病突變體的方法，其特征在于：所述的步驟1)中最佳誘變時間的具體篩選方法為：

以大蒜莖盤為材料，在自來水下沖洗3h，在無菌條件下用酒精浸泡1min，用濃度為0.5％的次氯酸鈉消毒15min，無菌水沖洗3次后，切取5mm厚的莖盤，按“十”字型切成4塊，備用；

將處理好的大蒜莖盤放入濃度為1％的甲基磺酸乙酯(EMS)浸泡2、4、6、8、12h，后用1M硫代硫酸鈉溶液浸泡5min，蒸餾水洗凈，擦干，接種在MS培養基上；

光照培養28d，統計萌發數，將接種莖盤一半不能萌發的處理時間確定為適宜的誘變時長。

3.根據權利要求1所述的甲基磺酸乙酯離體誘變大蒜抗葉枯病突變體的方法，其特征在于：所述的步驟2)中最佳粗毒素篩選壓的具體確定方法為：

將處理好的莖盤按“十”字型切成4塊，放入濃度為2.0％的EMS磷酸緩沖液浸泡8h；

接種在粗毒素體積分數分別為0、5％、10％、15％、20％、25％、30％的篩選培養基上，每個處理接種40個外植體，設置3次重復，并以不添加EMS的磷酸緩沖液處理設置為對照；

光照培養30d后，將莖盤萌發率為2.2％的粗毒素體積分數30％確定為最終的粗毒素篩選壓。

4.根據權利要求1所述的甲基磺酸乙酯離體誘變大蒜抗葉枯病突變體的方法，其特征在于：所述的步驟3)的具體方法為：將處理好的莖盤按“十”字型切成4塊，放入1.0％EMS的磷酸緩沖液浸泡6h，將誘變處理后的莖盤用1M硫代硫酸鈉溶液浸泡5min，蒸餾水浸泡30min，用滅過菌的濾紙擦干，接種在粗毒素體積分數分別為30％的篩選培養基上，進行抗病植株的篩選。