[發(fā)明專利]一種腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110984087.0
• 申請(qǐng)日: 2021-08-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113671084B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李晶;魏鑫;潘亞男;司夢(mèng)雅;涂海欣;張珍巖;銀仁莉;王裕文;李沛然;林澤;王振;焦曉陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 張文俊

本發(fā)明提供了一種腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，包括以下步驟：向腦脊液中加入穩(wěn)定同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)物后再與甲酸水溶液混合得到混合液；將混合液通過(guò)固相萃取小柱，然后使用甲醇洗脫，再將洗脫液使用甲醇水溶液進(jìn)行復(fù)溶；對(duì)復(fù)溶后的溶液進(jìn)行高效液相三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)。本發(fā)明的腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，采用高效、重復(fù)性好的固相萃取方法結(jié)合高效液相色譜三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測(cè)定腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝物，利用同位素標(biāo)記物方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝物定性、定量測(cè)定，檢測(cè)方法靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)藥檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

新煙堿類殺蟲(chóng)劑是一種新型高效、安全、選擇型好且對(duì)哺乳動(dòng)物低毒性的廣譜殺蟲(chóng)劑，該類殺蟲(chóng)劑的靶標(biāo)為煙堿型突觸后膜乙酰膽堿受體，主要作用于昆蟲(chóng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)。自上世紀(jì)90年代開(kāi)發(fā)以來(lái)，全世界140個(gè)國(guó)家廣泛使用新煙堿類殺蟲(chóng)劑，目前占全球農(nóng)藥市場(chǎng)的25％以上。基于其優(yōu)越的殺蟲(chóng)性能及選擇性毒性，該類殺蟲(chóng)劑不僅廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，而且在家居生活中也有大量的應(yīng)用，如草坪、家庭花園維護(hù)管理、牲畜和寵物除蟲(chóng)等。新煙堿殺蟲(chóng)劑全球范圍的應(yīng)用，已導(dǎo)致其殘留于多種環(huán)境樣品中，如土壤、室內(nèi)灰塵、水體環(huán)境和食品等，人體尿液和血液中也有新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物殘留的報(bào)道，檢出率高達(dá)63-100％。流行病學(xué)報(bào)道指出，新煙堿類殺蟲(chóng)劑人體長(zhǎng)期暴露可能誘發(fā)先天性心臟病、無(wú)腦畸形和自閉癥等疾病。

目前，現(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)的新煙堿及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)數(shù)量有限(6～8)，操作較為繁瑣，定量準(zhǔn)確性有待進(jìn)一步提高。基于新煙堿殺蟲(chóng)劑的標(biāo)靶受體性質(zhì)，該類物質(zhì)極有可能進(jìn)入腦部影響神經(jīng)系統(tǒng)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已驗(yàn)證高濃度啶蟲(chóng)脒、噻蟲(chóng)胺暴露可導(dǎo)致其殘留于腦部組織中。為了準(zhǔn)確定性、定量新煙堿類殺蟲(chóng)劑在人體腦脊液中的殘留，急需一種簡(jiǎn)單便捷的新煙堿類殺蟲(chóng)劑在腦脊液中的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提出了一種腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，以解決或部分解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題。

第一方面，本發(fā)明提供了一種腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

向腦脊液中加入穩(wěn)定同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)物后再與甲酸水溶液混合得到混合液；

將混合液通過(guò)固相萃取小柱，然后使用甲醇洗脫，再將洗脫液使用甲醇水溶液進(jìn)行復(fù)溶；

對(duì)復(fù)溶后的溶液進(jìn)行高效液相三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)。

優(yōu)選的是，所述的腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，高效液相三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)條件為：選用Waters ACQUITY BEH C18為高效液相色譜柱，所述高效液相色譜柱的長(zhǎng)度為100mm、內(nèi)徑為2.1mm、填料顆粒直徑為1.7μm；采用正負(fù)離子模式收集數(shù)據(jù)，串聯(lián)質(zhì)譜條件采用電噴霧電離，正離子模式檢測(cè)條件為：碰撞氣10psi，氣簾氣35psi，離子噴霧電壓4000V，離子源溫度650℃，離子源氣體1和2均為70psi；負(fù)離子模式檢測(cè)條件為：碰撞氣8psi，氣簾氣30psi，離子噴霧電壓-4500V，離子源溫度600℃，離子源氣體1和2分別為70psi和50psi。

優(yōu)選的是，所述的腦脊液中新煙堿類殺蟲(chóng)劑及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，采用梯度洗脫程序進(jìn)行洗脫，梯度洗脫程序具體為：

時(shí)刻0min：采用體積比為5:95的乙腈和甲酸水溶液組成的混合液做流動(dòng)相，流速為0.35mL/min；

時(shí)刻0.6min：采用體積比為5:95的乙腈和甲酸水溶液組成的混合液做流動(dòng)相，流速為0.35mL/min；

時(shí)刻4min：采用體積比為99:1的乙腈和甲酸水溶液組成的混合液做流動(dòng)相，流速為0.35mL/min；