[發明專利]一種檢測仙臺病毒抗體的免疫熒光層析試紙條及其應用

在審

• 申請號: 202110983784.4
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113804882A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 叢鋒;練月曉;朱余軍;伍妙梨;黃碧洪;羅銀珠;肖麗
• 申請（專利權）人: 廣東省實驗動物監測所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 林德強

本發明公開了一種檢測仙臺病毒抗體的免疫熒光層析試紙條及其應用，所述試紙條包括底板，在底板上依次銜接有樣品墊、結合墊、纖維素膜和吸水墊，所述結合墊上設有熒光微球標記的仙臺病毒抗原，所述纖維素膜上設有一條包被葡萄球菌蛋白A的檢測T線，以及一條包被羊抗小鼠IgG的質控C線。本發明基于以熒光微球作為示蹤劑建立一種檢測小鼠仙臺病毒抗體免疫熒光層析試紙條。與傳統快速檢測技術性能比較，具有很好的敏感性、特異性和穩定性，減少樣本中干擾物質的影響，檢測結果準確可靠，檢測范圍更寬，操作簡單，快速，成本低廉，易于推廣。

技術領域

本發明屬于免疫熒光層析試紙檢測領域，具體涉及一種檢測仙臺病毒抗體的免疫熒光層析試紙條及其應用。

背景技術

仙臺病毒(Sendai virus，SeV)屬于副粘病毒科副粘病毒屬(Paramyxoviridae)，是一個具有細胞融合活性的包膜病毒，可引起嚙齒類動物呼吸道疾病，通常表現為被毛粗亂、弓背、呼吸困難、發育不良、消瘦等癥狀。在實驗鼠群中多呈隱性感染，鼠群一旦感染常會改變體內細胞免疫反應，干擾試驗結果，而且難以從鼠群中清除，影響幼鼠發育成長和降低成年母鼠的繁殖率。1952年，首先在日本分離到了仙臺病毒，繼而世界各地都有報道。本病一年四季均可發生，但以冬春季多發，加強日常監測，建立無仙臺病毒的鼠群，是提高嚙齒類實驗動物質量的重要措施之一。

仙臺病毒是實驗用大鼠和小鼠嚴格控制的病毒性疾病，嚴重影響實驗動物的質量，因此清潔級以上實驗大小鼠中必須嚴格控制。對小鼠、大鼠仙臺病毒的診斷最傳統、最經典的方法是病毒分離。該方法比較耗時、繁瑣。目前在病毒性病原體的檢測中多采取血清學方法，仙臺病毒具有凝集動物紅細胞的特點，使血凝抑制試驗(HI)檢測仙臺病毒抗體得到了發展，此試驗簡便易操作，但要選擇敏感性的紅細胞，要嚴格控制試劑，以減少試驗不穩定性和閱讀結果主觀性強的問題。補體固定試驗(CF)需要注意過夜溫育，血清需要做系列稀釋，結果判定主觀性強且補體的滴度直接影響檢測的準確性。在我國的實驗動物國家標準中也推薦了如免疫熒光法和酶聯免疫吸附試驗等血清學方法，針對抗體的酶聯免疫吸附法(ELISA)方法發展很快，ELISA檢測仙臺病毒抗體，敏感性高，特異性好，但耗時比較久，只適用于實驗室檢測。免疫熒光法有較好的敏感性，但需要熒光顯微鏡，不適宜基層單位的檢測之需。

仙臺病毒傳染性強，又容易擴散，是最難控制的病毒之一。因此，建立高靈敏、特異性好、快速、簡便且成本低廉的新型檢測方法是感染性疾病診斷的當務之急。

免疫層析試驗作為POCT的一種主要方法，其產品已經從第一代膠體金定性免疫層析檢測、第二代膠體金半定量色板卡比色或儀器閱讀，向著第三代全定量、自動化、信息化、智能化方向發展。該技術獨特的立體反應模式，具有酶聯免疫吸附法、化學發光法、氣相-液相色譜法、毛細管電泳等方法所不具備的優點，快速、簡便、靈敏、直觀、價格低廉，可進行現場檢測，在檢測技術中處于重要地位，是對傳統和大型儀器檢測方法的有力補充。傳統示蹤物為膠體金。膠體金也稱金溶膠，是由金鹽還原成原子金后形成的金顆粒懸液。膠體金具有膠體性質、呈色性及光吸收性。膠體金免疫層析技術已經在臨床診療中廣泛應用，在許多方面具有明顯優勢，但是在實際應用中也暴露出一些不足。膠體金試紙條/卡結果判定容易受環境、標本加樣量多少，觀察時間等因素影響；一些病原體檢測存在交叉反應；檢測中可出現假陽性和假陰性反應，存在前帶現象，其敏感性和特異性不如ELISA和化學發光法；多數產品不能定量或定量不準確，檢測范圍有待進一步拓寬。

發明內容

本發明的第一個目的在于，針對現有試紙條檢測范圍小、靈敏度低等問題，提供一種靈敏度更高，檢測范圍更大的免疫熒光層析試紙條。

本發明的第二個目的在于提供上述試紙條在檢測仙臺病毒抗體中的應用。

本發明的第三個目的在于提供一種檢測仙臺病毒抗體的試劑盒。

本發明的第四個目的在于提供一種檢測仙臺病毒抗體的方法。

本發明所采取的技術方案是：