[發明專利]一種雄激素性脫發細胞模型的構建方法

有效

• 申請號: 202110982838.5
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113621556B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 苗勇;胡志奇;張鈺凡;杜麗娟
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學南方醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 深圳珠峰知識產權代理有限公司 44899
• 代理人: 黃偉

1.一種雄激素性脫發細胞模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

S10a、取雄激素性脫發患者前額部的禿發區的毛囊并進行沖洗；

S10b、取沖洗后的毛囊的毛球部，加入濃度為2mg/ml的膠原酶消化，獲得毛乳頭；

S10c、對所述毛乳頭進行離心處理，棄上清液；采用1%(v/v)青霉素-鏈霉素和含有20%(v/v)胎牛血清的DMEM培養基進行重懸，然后接種于細胞培養瓶中，并添加1%(v/v)青霉素-鏈霉素和含有20%(v/v)胎牛血清的DMEM培養基在37℃和5%CO₂培養箱中進行培養；

S10d、當細胞生長超過瓶底面積的80%時，采用胰蛋白酶/EDTA消化貼壁的毛乳頭細胞，并以1:2的比例轉移到新的培養皿中，傳至第二代；

S20a、取接受毛發移植手術的雄激素性脫發患者的枕部的非禿發區域的毛囊，并進行沖洗；

S20b、取該毛囊的隆突區，采用濃度為0.1%的中性酶處理45min，然后分離、摘除真皮鞘，采用濃度為0.25%的胰蛋白酶處理真皮成分10min并過濾；

S20c、將過濾后的外根鞘細胞放入預包被10μg/mL人纖維連接蛋白的培養皿中，并于該培養皿中加入人表皮角質形成細胞培養基(KSFM)；

S30a、將第二代毛乳頭細胞采用0.25%(w/v)的胰蛋白酶/EDTA消化處理，然后采用含有10%胎牛血清(v/v)的DMEM進行中和，獲得毛乳頭細胞懸液；

S30b、將毛乳頭細胞懸液離心處理，棄去上清液；然后采用DMEM重懸，并進行細胞計數；

S30c、在96孔超低吸附板中進行接種，每孔接種3000個毛乳頭細胞，并置于37℃和5%CO₂的培養箱中進行培養至細胞聚集成直徑為200μm的毛乳頭細胞球；

S40a、將10個3D培養的毛乳頭細胞球放入于transwell培養皿的上室；

S40b、將4000個外根鞘細胞提前一天放入無血清的DMEM中，再接種于經10μg/mL人纖維連接蛋白預處理過的transwell培養皿的下室，再加入人表皮角質形成細胞培養基(KSFM)；

S40c、1天后更換人表皮角質形成細胞培養基(KSFM)，然后加入10?μM二氫睪酮，獲得雄激素性脫發的細胞模型。

2.根據權利要求1所述的雄激素性脫發細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟S10c中，離心條件為1000rpm離心5min。

3.根據權利要求1所述的雄激素性脫發細胞模型的構建方法，其特征在于，步驟S20b中，過濾采用70μm濾器。

4.根據權利要求1所述的雄激素性脫發細胞模型的構建方法，其特征在于，S30b中的離心轉速為1000rpm。

5.根據權利要求1所述的雄激素性脫發細胞模型的構建方法，其特征在于，S30b中的重懸采用的DMEM含有10%胎牛血清(v/v)。