[發(fā)明專利]一株海洋假單胞菌產(chǎn)出高含量環(huán)二肽類化合物方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110982551.2
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113699204A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜風(fēng)強(qiáng);邵海峰
• 申請（專利權(quán)）人: 杜風(fēng)強(qiáng)
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12N1/20;C12R1/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一株海洋假單胞菌產(chǎn)出高含量環(huán)二肽類化合物方法，其包括如下步驟，1）將一株海洋假單胞菌即F?Q127菌種從固體斜面培養(yǎng)基中取適量接種到內(nèi)裝100mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在28℃、180r·min－1的條件下?lián)u床培養(yǎng)48h，作為種子培養(yǎng)液；2）將該種子培養(yǎng)液按體積分?jǐn)?shù)7%的接種量接種于含150mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，共接種15L，在28℃180r·min－1的條件下?lián)u床培養(yǎng)5d，再對培養(yǎng)液進(jìn)行萃取，得到菌種發(fā)酵液的氯仿萃取物和菌絲體的氯仿萃取物；經(jīng)薄層檢查，菌種發(fā)酵液的氯仿萃取物和菌絲體的氯仿萃取物主要斑點(diǎn)相似，將兩部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物；3）對氯仿萃取物采用流式細(xì)胞術(shù)測定化合物的細(xì)胞周期抑制活性，得到環(huán)二肽類化合物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及環(huán)二肽類化合物制備，具體為一株海洋假單胞菌產(chǎn)出高含量環(huán)二肽類化合物方法。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)可由酸、堿或酶水解，在水解過程中蛋白質(zhì)逐步降解成為蛋白胨、多肽、三肽和二肽等越來越小的蛋白質(zhì)碎片，直到最后成為氨基酸混合物。

在體內(nèi)二肽通常能被二肽酶所水解而成為兩個游離氨基酸。在體內(nèi)腸黏膜細(xì)胞上也存在著吸收二肽或三肽的耗能主動運(yùn)轉(zhuǎn)體系，故有二肽吸收入細(xì)胞先于游離氨基酸之說。

二肽是一種化合物，是天然氨基酸即阿爾法氨基酸(氨基連在連有羧基的碳上)中的氨基于羧基脫水縮合而成的。其中只含一個肽鍵即-CO-NH-。可水解。

環(huán)二肽本質(zhì)---氨基酸肽鍵形成的化合物活性肽，與動物營養(yǎng)、荷爾蒙、酵素抑制、調(diào)節(jié)免疫、抗菌、抗病毒、抗氧化作用直接。

現(xiàn)在環(huán)二肽類化合物類化合物制備不便，產(chǎn)量難以提升，同時制備方法繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一株海洋假單胞菌產(chǎn)出高含量環(huán)二肽類化合物方法，有效的解決了現(xiàn)在環(huán)二肽類化合物類化合物制備不便，產(chǎn)量難以提升，同時制備方法繁瑣的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：本發(fā)明包括如下步驟，1）將一株海洋假單胞菌即F-Q127菌種從固體斜面培養(yǎng)基中取適量接種到內(nèi)裝100mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在28℃、180r·min－1的條件下?lián)u床培養(yǎng)48h，作為種子培養(yǎng)液；

2）將該種子培養(yǎng)液按體積分?jǐn)?shù)7%的接種量接種于含150mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，共接種15L，在28℃180r·min－1的條件下?lián)u床培養(yǎng)5d，再對培養(yǎng)液進(jìn)行萃取，得到菌種發(fā)酵液的氯仿萃取物和菌絲體的氯仿萃取物；經(jīng)薄層檢查，菌種發(fā)酵液的氯仿萃取物和菌絲體的氯仿萃取物主要斑點(diǎn)相似，將兩部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物；

3）對氯仿萃取物采用流式細(xì)胞術(shù)測定化合物的細(xì)胞周期抑制活性，得到環(huán)二肽類化合物。

有益效果：通過本發(fā)明的制備方法，由一株海洋假單胞菌可產(chǎn)出高含量的環(huán)二肽類化合物，分別鑒定為環(huán)(丙-亮)［cyclo(Ala-Leu)，1］、環(huán)(丙-異亮)［cyclo(Ala-Ile)，2］、環(huán)(丙-纈)［cyclo(Ala-Val)，3］、環(huán)(苯丙-亮)［cyclo(Phe-Leu)，4］、環(huán)(丙-脯)［cyclo(Ala-Pro)，5］和環(huán)(苯丙-纈)［cyclo(Phe-Val)，通過不同誘導(dǎo)時機(jī)目的蛋白的表達(dá)實驗方法得到：海洋假單胞菌F-Q127生長5h時加入終濃度0.3mmol/L的誘導(dǎo)劑IPTG誘導(dǎo)4h,為目的蛋白表達(dá)的最優(yōu)條件。

具體實施方式

下面對本發(fā)明的具體實施方式做進(jìn)一步詳細(xì)說明。

實施例，本發(fā)明提供一株海洋假單胞菌產(chǎn)出高含量環(huán)二肽類化合物方法，包括如下步驟，1）將一株海洋假單胞菌即F-Q127菌種從固體斜面培養(yǎng)基中取適量接種到內(nèi)裝100mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在28℃、180r·min－1的條件下?lián)u床培養(yǎng)48h，作為種子培養(yǎng)液；