[發(fā)明專利]一種犬吉氏巴貝斯蟲抗體乳膠凝集檢測試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110981340.7
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113740529B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賀蘭;張紅艷;趙俊龍;崔杰;戰(zhàn)雪燕;亢婷
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/546;C07K14/44
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 徐紹新

1.一種制備犬吉氏巴貝斯蟲(Babesia?gibsoni)抗體乳膠凝集檢測試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）構(gòu)建重組表達質(zhì)粒并原核表達和純化犬吉氏巴貝斯蟲的表面抗原BgP47重組蛋白和分泌抗原BgSA1重組蛋白，所述表面抗原BgP47重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示，所述分泌抗原BgSA1重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示；

2）乳膠試劑的活化，所述乳膠試劑是粒徑0.6-1μm的羧基化聚苯乙烯乳膠；

3）將活化的乳膠試劑用硼酸鹽緩沖液pH=8.0配置成重量濃度為0.5-5%的溶液，然后向100-300?μL溶液中各加入160?μg的表面抗原BgP47重組蛋白和分泌抗原BgSA1重組蛋白，室溫?fù)u床90?min后離心，收集沉淀；

4）將沉淀離心后用硼酸緩沖液pH=8.0重懸洗滌3次，用磷酸緩沖液pH=7.5懸浮后于4℃保存，得到兩種蛋白共同致敏的乳膠試劑；

5）試劑盒的組裝，

所制備的試劑盒與犬吉氏巴貝斯蟲陽性血清能出現(xiàn)強陽性凝集反應(yīng)，而與犬吉氏巴貝斯蟲陰性血清不發(fā)生反應(yīng)，并且與犬瘟病毒、細(xì)小病毒、狂犬病毒、糞類圓線蟲多種犬傳染病的陽性血清均不發(fā)生凝集反應(yīng)。

2.如權(quán)利要求1所述犬吉氏巴貝斯蟲抗體乳膠凝集檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：所述溶液的濃度為2%。

3.如權(quán)利要求1所述犬吉氏巴貝斯蟲抗體乳膠凝集檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述乳膠試劑的具體活化方法如下：向乳膠試劑中加入碳酸鹽緩沖液，離心洗滌1-5次，再向沉淀中加入磷酸緩沖液，離心洗滌1-5次，接著向沉淀中加入含1-5%碳二亞胺的磷酸鹽緩沖液，重懸后30℃搖床50?min，最后用硼酸緩沖液離心洗滌。

4.權(quán)利要求1-3中任意一項所述制備方法所制備的犬吉氏巴貝斯蟲(Babesia?gibsoni)抗體乳膠凝集檢測試劑盒。

5.權(quán)利要求4所述的試劑盒在犬吉氏巴貝斯蟲抗體非診斷目的檢測中的應(yīng)用。