[發明專利]YH66-RS10865基因改造得到的工程菌及其在制備纈氨酸中的應用

在審

• 申請號: 202110980059.1
• 申請日: 2021-08-25
• 公開（公告）號: CN113683667A
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 付麗霞;賈慧萍;孟剛;趙春光;魏愛英;田斌
• 申請（專利權）人: 寧夏伊品生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/34
• 分類號: C07K14/34;C12N1/21;C12N15/77;C12N15/31;C12P13/08;C12R1/15
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發明公開了一種YH66?RS10865基因改造得到的工程菌及其在制備纈氨酸中的應用。本發明提供了用于抑制YH66?RS10865基因表達的物質或降低YH66?RS10865蛋白豐度的物質或降低YH66?RS10865蛋白活性的物質在提高細菌纈氨酸產量中的應用。本發明提供了重組菌，是抑制細菌中的YH66?RS10865基因表達得到的。本發明還保護制備纈氨酸的方法：發酵所述重組菌。本發明發現YH66?RS10865蛋白對細菌的纈氨酸產量存在負調控，抑制YH66?RS10865基因表達提高纈氨酸產量，過表達YH66?RS10865基因降低纈氨酸產量。進一步，本發明發現了YH66?RS10865^A844C,C846A蛋白蛋白及其編碼基因和應用。本發明對于纈氨酸工業化生產，具有重大的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種YH66-RS10865基因改造得到的工程菌及其在制備纈氨酸中的應用，具體的所述改造為A844C和C846A。

背景技術

纈氨酸是組成蛋白質的20種氨基酸之一，是人體必需的8種氨基酸和生糖氨基酸，它與其他兩種高濃度氨基酸(異亮氨酸和亮氨酸)一起工作促進身體正常生長，修復組織，調節血糖，并提供需要的能量。在參加激烈體力活動時，纈氨酸可以給肌肉提供額外的能量產生葡萄糖，以防止肌肉衰弱。纈氨酸還幫助從肝臟清除多余的氮(潛在的毒素)，并將身體需要的氮運輸到各個部位。

纈氨酸是一種必需氨基酸，這意味著身體本身不能生產，必須通過膳食來源獲得補充。它的天然食物來源包括谷物、奶制品、香菇、蘑菇、花生、大豆蛋白和肉類。盡管大多數人都可以從飲食中獲得足夠的數量，但是纈氨酸缺乏癥的案例也屢見不鮮。當纈氨酸不足時，大腦中樞神經系統功能會發生紊亂，共濟失調而出現四肢震顫。通過解剖切片腦組織，發現有紅核細胞變性現象，晚期肝硬化病人因肝功能損害，易形成高胰島素血癥，致使血中支鏈氨基酸減少，支鏈氨基酸和芳香族氨基酸的比值由正常人的3.0-3.5降至1.0-1.5，故常用纈氨酸等支鏈氨基酸的注射液治療肝功能衰竭以及酗酒和吸毒對這些器官造成的損害。此外，纈氨酸也可作為加快創傷愈合的治療劑。L-纈氨酸，別名為2-氨基-3-甲基丁酸，CAS號為72-18-4，MDL號為MFCD00064220，EINECS號為200-773-6。目前制備L-纈氨酸主要是化學合成法?；瘜W合成法的局限性：生產成本高，反應復雜，步驟多，且有許多副產物。

發明內容

本發明的目的是提供一種YH66-RS10865基因改造得到的工程菌及其在制備纈氨酸中的應用。

本發明提供了用于抑制YH66-RS10865基因表達的物質或降低YH66-RS10865蛋白豐度的物質或降低YH66-RS10865蛋白活性的物質的應用；

所述應用為如下(Ⅰ)或(Ⅱ)：

(Ⅰ)在提高細菌纈氨酸產量中的應用；

(Ⅱ)在生產纈氨酸中的應用。

所述YH66-RS10865基因為編碼YH66-RS10865蛋白的基因；

所述YH66-RS10865蛋白為如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)序列表的序列3所示的蛋白質；

(a2)來源于細菌且與(a1)具有95％以上同一性且與細菌產纈氨酸相關的蛋白質；

(a3)將(a1)所示的蛋白質經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的且與細菌產纈氨酸相關的由(a1)衍生的蛋白質。

這里使用的術語“同一性”指與天然氨基酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或計算機軟件進行評價。使用計算機軟件，兩個或多個序列之間的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用來評價相關序列之間的同一性。