[發(fā)明專利]全能核酸酶的蛋白制備方法

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• 申請日: 2021-08-24
• 公開（公告）號: CN113462673A
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉絮;吳笛;劉梓晗;趙亮
• 申請（專利權(quán)）人: 晟林源（河南）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/55;C12N15/70
• 代理公司: 鄭州隆盛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41143
• 代理人: 鮑立陽

1.一種全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1：首先使用信號肽制備SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列，然后將帶有SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列的表達盒導(dǎo)入宿主細胞；

S2：培養(yǎng)S1中導(dǎo)入后的宿主細胞，并加入IPTG誘導(dǎo)表達SEQ ID No.1所示蛋白；其中培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)至OD_600nm為0.6-1.0，加入1mM IPTG，28℃誘導(dǎo)表達；

S3：在S2步驟培養(yǎng)完成后，通過滲透休克法提取周質(zhì)空間表達的SEQ ID No.1所示蛋白；其中滲透休克法具體操作步驟為：收集培養(yǎng)物于12000g離心1min，收集菌體，高滲溶液混勻10min，離心去上清，5mM MgCl₂溶液混勻10min，離心取上清即為蛋白上清溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：所述步驟S1中,所述表達盒是指能夠在宿主細胞中表達前文第二方面中所述DNA序列，該DNA序列不但可包括啟動目的基因轉(zhuǎn)錄的啟動子，還可包括終止目的基因轉(zhuǎn)錄的終止子。進一步，所述表達盒還可包括增強子序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：所述信號肽采用OmpA、PelB、STII和DsbA中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：所述步驟S3中的高滲溶液關(guān)鍵組分為10％、15％、20％、25％、30％蔗糖溶液中的一種。進一步地，所述宿主細胞可為大腸桿菌，酵母，HEK293細胞，CHO細胞和昆蟲細胞等。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：所述宿主細胞為大腸桿菌、酵母、HEK293細胞、CHO細胞、昆蟲細胞中的一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：所述宿主細胞具體為大腸桿菌BL21(DE3)細胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全能核酸酶的蛋白制備方法，其特征在于：所述SEQ ID No.1氨基酸序列的核酸序列，其編碼基因可為如下任一：

(a1)SEQ ID No.2所示的DNA分子，編碼全能核酸酶，即SEQ ID No.1序列；

(a2)SEQ ID No.3所示的DNA分子，編碼天然信號肽-全能核酸酶；

(a3)SEQ ID No.4所示的DNA分子，編碼OmpA-全能核酸酶；

(a4)SEQ ID No.5所示的DNA分子，編碼PelB-全能核酸酶；

(a5)SEQ ID No.6所示的DNA分子，編碼STII-全能核酸酶；

(a6)SEQ ID No.7所示的DNA分子，編碼DsbA-全能核酸酶；

(a7)在嚴格條件下與(a1)，或(a2)，或(a3)，或(a4)，或(a5)，或(a6)限定的DNA分子雜交且編碼SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子；

(a8)與(a1)，或(a2)，或(a3)，或(a4)，或(a5)，或(a6)，或(a7)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且編碼SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子。

8.一種如權(quán)利要求1-7任意一項所述的SEQ ID No.1所示多肽氨基酸序列或其相關(guān)生物材料的應(yīng)用方法，其特征在于：

P1：細胞或細菌裂解液配合使用多肽氨基酸序列或其相關(guān)生物材料使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性；

P2：蛋白純化過程中使用多肽氨基酸序列或其相關(guān)生物材料去除核酸分子，降低純化過程溶液粘性；

P3：重組蛋白、病毒顆粒等生物制品使用多肽氨基酸序列或其相關(guān)生物材料去除DNA或RNA污染；

所述相關(guān)生物材料為SEQ ID No.1所示多肽的編碼基因或含有所述編碼基因的表達盒或重組載體或重組菌或轉(zhuǎn)基因細胞系。