[發明專利]一種西番蓮無菌外植體的培育方法

在審

• 申請號: 202110976666.0
• 申請日: 2021-08-24
• 公開（公告）號: CN113598052A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 管艷;李玲;劉世紅;殷振華;桂明春;粱國平;唐敏;田海
• 申請（專利權）人: 云南省熱帶作物科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發明提供了一種西番蓮無菌外植體的培育方法，涉及植物組培技術領域，包括以下步驟：采集西番蓮幼嫩莖段作為外植體，沖洗后采用飽和洗衣粉液浸泡，漂洗，得預處理外植體；采用利福平溶液對預處理外植體進行無菌預培養，得到預培養外植體；將所述預培養外植體剪切成莖段后進行消毒處理，得到無菌莖段；將所述無菌莖段在MS基本培養基中進行培養，獲得無菌西番蓮外植體。本發明所述的培育方法通過外植體的兩次預處理方法，升汞殺菌方法及時間等結合，在降低污染率的同時也降低了因消毒滅菌導致的褐化率和死亡率，從而大大提高了外植體的存活率，降低了組培的生產成本。

技術領域

本發明涉及植物組培技術領域，尤其涉及一種西番蓮無菌外植體的培育方法。

背景技術

西番蓮(Passifloracaerulea L.)是典型的熱帶、亞熱帶漿果類果樹，屬于西番蓮科(Passifloraceae)西番蓮屬(Passiflora L.)，是一種多年生常綠藤本植物。西番蓮果實具有獨特而濃郁的芳香氣味，酸甜可口，是著名的果汁用熱帶水果，有“果汁之王”的美譽。西番蓮的組培技術到目前為止還難以推廣應用于種苗繁育，其中主要原因之一就是外植體消毒難，尤其是從野外田間采集的外植體，由于表面和內部都攜帶一定數量的細菌和真菌，尤其是內生菌。目前開展的西番蓮組織培養技術的研究以西番蓮莖段為外植體，消毒均采用2％次氯酸鈉、0.1％～0.2％升汞兩種消毒劑，消毒時間為10～20min。結果是升汞的消毒效果明顯優于次氯酸鈉。所以，現有西番蓮外植體消毒滅菌技術中通常選用0.1％～0.2％的升汞進行10～20min的消毒滅菌。但是，其仍存在下述缺點：1.隨著消毒劑濃度或消毒時間的增加，污染率呈下降趨勢，而死亡率和褐化率呈上升趨勢，存活率呈下降趨勢。2.內生菌很難根除，隨著繼代次數的增加，內生菌污染也隨之嚴重。

發明內容

本發明的目的在于提供一種西番蓮無菌外植體的培育方法，在降低污染率的同時也降低了因消毒滅菌導致的褐化率和死亡率，大大提高了外植體的存活率，降低了組培的生產成本。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種西番蓮無菌外植體的培育方法，包括以下步驟：

采集西番蓮幼嫩莖段作為外植體，沖洗后采用飽和洗衣粉液浸泡，漂洗，得預處理外植體；

采用利福平溶液對預處理外植體進行無菌預培養，得到預培養外植體；

將所述預培養外植體剪切成莖段后進行消毒處理，得到無菌莖段；

將所述無菌莖段在MS基本培養基中進行培養，獲得無菌西番蓮外植體。

優選的，所述外植體的長度為12～15cm，保留有3～4個腋芽、頂芽及頂芽上端的1～2片葉。

優選的，所述外植體浸泡的時間為10～30min。

優選的，所述漂洗的次數為2～4次。

優選的，所述利福平溶液的濃度為80～120mg/L，外植體浸入利福平溶液中2～3cm。

優選的，所述預培養溫度為22～30℃，光照時間為8～12h/d，時間為2～4d。

優選的，所述無菌莖段長為0.8～2.0cm，帶有1～2個腋芽。

優選的，無菌莖段消毒處理的具體方式為：采用體積分數為75～90％的酒精消毒處理10～60s，再采用質量濃度為0.05～0.15％的升汞表面消毒10～12min，沖洗3～5次。

優選的，在MS基本培養基中培養8～12d，培養溫度為25～28℃，光照強度為1000～2000lux，光照時間為8～12h/d。

優選的，所述每接種一個莖段需要25～30ml MS基本培養基。