[發(fā)明專利]單細胞測序作為標志物在制備診斷原發(fā)性干燥綜合征中的應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2021-08-23
• 公開（公告）號: CN113564246A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 萬磊;劉健;黃傳兵;諶曦;范海霞;葛瑤;劉天陽;劉磊;李明;趙磊;孫廣瀚;朱子衡;李舒;馬熙檬
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院（安徽省中醫(yī)院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 焦作加貝專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41182
• 代理人: 馮新志

本發(fā)明提供了一種單細胞測序作為標志物在制備診斷原發(fā)性干燥綜合征中的應(yīng)用，單細胞測序通過流式活化細胞分離外周血單個核細胞得到，原發(fā)性干燥綜合征中主要由NK細胞組成，其次為T細胞和B細胞。本發(fā)明的單細胞測序技術(shù)在單個細胞水平上對基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組及表觀基因組進行測序，能夠從組織樣本中獲得不同細胞間的異質(zhì)性信息，具備準確、高效、安全可靠的優(yōu)點，從而在細胞層面篩選出干燥綜合征的差異表達標志物，彌補干燥綜合征診斷的不足；本發(fā)明的單細胞測序簡便，不需特別準備、不需特定時間，隨時隨地均可采集標本。另外，其還有創(chuàng)傷性極小和敏感性高的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種單細胞測序作為標志物在制備診斷原發(fā)性干燥綜合征中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

原發(fā)性干燥綜合征(pSS)起病多隱匿，大多數(shù)患者很難說出明確起病時間，臨床表現(xiàn)多樣，可涉及全身多個系統(tǒng)，病情輕重差異較大，治療手段有限。pSS臨床廣泛而復(fù)雜，是一個易被誤診、漏診的病種，其診斷標準的制定在五十多年發(fā)展、演化的過程中先后出現(xiàn)了13個分類標準，但至今臨床應(yīng)用上仍存在各種不滿意。pSS缺乏單一而客觀的診斷指標，傳統(tǒng)診斷常需要依據(jù)多項指標根據(jù)分類標準進行綜合分析，包括主觀癥狀以及唾液腺、眼部、血清學和組織病理學等客觀檢查。

主觀癥狀的衡量及評定具有顯著的個體及地區(qū)差異，特異性較差；唾液流率的個體差異較大，沒有統(tǒng)一的采集方法；Schirmer試驗、眼部染色評分、淚膜破裂試驗，可評價淚腺的分泌功能，但其參數(shù)在各個標準中有較大差異，不同程度pSS患者干眼表現(xiàn)差別較大，一部分pSS患者眼部尚未出現(xiàn)明顯受累，因此這些方法缺乏特異性，且結(jié)果誤差較大；自身抗體盡管具有重要的診斷價值，但約有三分之一患者抗體陰性，當前用于實驗室診斷的自身抗體-抗SSA、抗SSB、抗M3、抗心磷脂抗體和α-纖維蛋白抗體普遍存在著特異性或者敏感性較低的缺陷；組織病理學檢查一般采用唇腺活檢，但由于其為有創(chuàng)性操作，患者難以接受，臨床使用率較低且不利于預(yù)后評估，因此在病理診斷過程中面臨著難以廣泛實施的困境。特異性自身抗體檢查陰性并不能排除pSS的診斷，唇腺活檢因其有創(chuàng)性操作為患者身心帶來極大痛苦，在臨床的應(yīng)用并不廣泛，唾液腺和眼部檢查，個體差異大、特異性欠佳。

多學科合作和多種分類條目的檢查對pSS的診斷提出了挑戰(zhàn)，導(dǎo)致該病診斷與治療相對滯后。因此，新型診斷方式亟待被發(fā)掘，探索提高pSS診斷準確性的方法迫在眉睫。單細胞測序(single cell sequencing,SCS)技術(shù)，在pSS早期診斷、發(fā)展和預(yù)后評估中都具有極大的潛力。目前尚未有將單細胞測序法應(yīng)用于干燥綜合征的診斷。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的目的是提供一種單細胞測序作為標志物在制備診斷原發(fā)性干燥綜合征中的應(yīng)用

為達到上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種單細胞測序作為標志物在制備診斷原發(fā)性干燥綜合征中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，單細胞測序通過流式活化細胞分離外周血單個核細胞得到。

優(yōu)選地，外周血單個核細胞包括B細胞、NK細胞、T細胞、單核細胞和血小板細胞。

優(yōu)選地，原發(fā)性干燥綜合征主要由NK細胞組成。

優(yōu)選地，原發(fā)性干燥綜合征還包括T細胞和B細胞。

由于采用上述方案，本發(fā)明的有益效果是：

第一、本發(fā)明的單細胞測序技術(shù)在單個細胞水平上對基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組及表觀基因組進行測序，能夠從組織樣本中獲得不同細胞間的異質(zhì)性信息，具備準確、高效、安全可靠的優(yōu)點，從而在細胞層面篩選出干燥綜合征的差異表達標志物，彌補干燥綜合征診斷的不足。

第二、本發(fā)明的單細胞測序簡便，不需特別準備、不需特定時間，隨時隨地均可采集標本。