[發明專利]一種誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法

在審

• 申請號: 202110965497.0
• 申請日: 2021-08-23
• 公開（公告）號: CN113663133A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 孫長林;胡海濤
• 申請（專利權）人: 杭州新氧生物科技有限公司
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/22;A61L27/50;A61L27/60
• 代理公司: 嘉興啟帆專利代理事務所(普通合伙) 33253
• 代理人: 廖銀洪

1.一種誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，包括下列步驟：

(1)在無菌條件下采集獲取動物細胞；

(2)將步驟(1)中獲得的動物細胞所述進行傳代培養；

(3)將步驟(2)步獲得的傳代細胞調整細胞濃度為2-4×10⁶，溶解于生理鹽水中，所用生理鹽水的體積(ml)與步驟(2)步中動物細胞質量(g)的比例為7：4，于-85℃冰箱中冷凍至完全凍結，后置于38℃溫度條件下加熱，完成凍融操作，離心獲得細胞懸液X1和沉淀X1，收集細胞懸液X1，獲得初步裂解物；

(4)向步驟(3)步獲得的沉淀X1中加入含有體積濃度為0.15％的動物細胞裂解液的生理鹽水，所用生理鹽水的體積(ml)與步驟(2)步中動物細胞質量質量(g)的比例為7：4，于振幅為25％、5℃的超聲條件下超聲處理，離心獲得細胞懸液X2和沉淀X2，收集細胞懸液X2，獲得深度裂解物，棄去沉淀B；

(5)將步驟(3)步獲得的細胞懸液X1和步驟(4)步獲得的細胞懸液X2分別用生理鹽水溶解并混合，所用生理鹽水的體積(ml)與步驟(2)步中動物細胞質量(g)的比例為1：1，獲得細胞裂解液；

(6)將步驟(5)步獲得的細胞裂解液與誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶、NP-40裂解液混合，得到混合裂解液；

(7)將步驟(6)獲得的最終混合裂解液用于人體組織損傷修復再生。

2.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，步驟(1)中，所述動物細胞為自體細胞。

3.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，所述步驟(2)步中，將步驟(1)中獲得的動物細胞傳代培養至P3代細胞。

4.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，將所述步驟(3)步中的凍融操作重復3-5次。

5.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，所述步驟(3)步中的凍融操作的加熱時間為18-24min。

6.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，所述步驟(3)步中的超聲處理的時間為8-12min。

7.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，步驟(6)中，所述混合裂解液中誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶的濃度為0.004-0.008μg/mL。

8.根據權利要求1所述的誘導臍帶血中的TIMP2蛋白酶與細胞裂解液的修復再生方法，其特征在于，步驟(6)中，所述混合裂解液中NP-40裂解液體積百分比濃度為2-6％。