[發明專利]一種龍船花花藥愈傷組織的誘導方法

有效

• 申請號: 202110962646.8
• 申請日: 2021-08-20
• 公開（公告）號: CN113455400B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 余惠文;陸鑾眉;左梅;柯玲俊;王玉玲
• 申請（專利權）人: 閩南師范大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 林月萍

本發明公開了一種龍船花花藥愈傷組織的誘導方法，該方法是將處于單核期龍船花花蕾于4℃進行低溫預處理，用乙醇浸泡、次氯酸鈉溶液浸泡、無菌水沖洗后，將花藥剝出后接種于誘導培養基中，用封口膜密封好放入27℃±1℃條件下的培養箱中進行暗培養；其中，所述誘導培養基是由基礎培養基和植物生長調節劑組成，基礎培養基是在MS培養基中添加蔗糖、活性炭、瓊脂，植物生長劑為2,4?D和KT。本發明將龍船花花藥經過4℃低溫預處理后，在MS培養基+4 mg L^?12,4?D+2 mg L^?1 KT誘導培養，有利于提高龍船花花藥愈傷組織的誘導率，為龍船花花藥培養以及育種提供參考。

技術領域

本發明涉及龍船花育種領域，具體其涉及一種龍船花花藥愈傷組織的誘導方法。

背景技術

龍船花(Ixora chinensis Lam)又名白日紅、仙丹花、山丹花等，是茜草科(Rubiaceae)、龍船花屬(Ixora Linn.)植物，龍船花花色艷麗、植株較矮，應用廣泛。花藥培養在植物育種中具有重要的用途，研究龍船花花藥誘導愈傷的培養條件，建立龍船花花藥誘導愈傷培養體系，為獲得龍船花單倍體材料以及雙單倍體材料積累基礎，有利于培育龍船花新品種，以及開展相應分子機理研究。茜草科龍船花屬植物世界上約有400種，其中大多數品種分布在熱帶地區，而我國主要分布在云南省和福建省等大部分地區，約有19種。龍船花花期比較長，花期從3月至12月份，可用于鮮切花和園林景觀應用。龍船花屬植物在藥理特性方面、生理研究及栽培和應用等方面均有相關研究，而關于龍船花花藥誘導愈傷組織尚未見報道。花藥愈傷誘導培養基的各種生長調節劑濃度組合、植物材料的基因類型、花蕾的生長發育時期、植物材料的預處理方法差異等培養條件都會對花藥愈傷組織的誘導產生不一樣的影響。

發明內容

本發明的目的在于提供一種龍船花花藥愈傷組織的誘導方法，建立高效的龍船花花藥愈傷誘導體系，為龍船花花藥培養以及育種提供參考。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種龍船花花藥愈傷組織的誘導方法如下：

1)花穗取材一般在晴朗的早晨9點至11點摘取，選取單核中晚期、外觀品質正常、無病蟲害的龍船花花蕾，用枝剪將一整枝花團剪下；

2)配制誘導培養基，基礎培養基為MS培養基+蔗糖30g L^-1+活性炭0.5g L^-1+瓊脂8g L^-1，添加植物生長調節劑，分別是濃度為4mg L^-1 2,4-D和2mg L^-1KT，培養基的酸堿度調節至5.8；

3)將4℃預處理24-72h的花蕾摘下來放進體積為100mL的三角瓶里面，在紫外線滅菌后的超凈工作臺上先用75％乙醇浸泡30±2s后，用無菌水沖洗1次；再用2％次氯酸鈉溶液浸泡10-12min后，浸泡過程中輕微振蕩三角瓶，使其花蕾消毒徹底，最后用無菌水沖洗2-3次；

4)把花蕾放在有無菌濾紙的培養皿里，選擇處于單核期的個頭飽滿的、無破損的花藥以備接種，在接種過程中，用滅菌后的鑷子和解剖刀將花藥輕輕剝開，然后接種到誘導培養基中；

5)將接種好花藥的培養皿用封口膜密封好放入27℃±1條件下的培養箱進行暗培養，培養時間為20-40天。

本發明采用以上技術方案，其有益效果在于：

1.龍船花花藥培養15d即開始生長愈傷組織。

2.在MS培養基+4mg L^-1 2,4-D+2mg L^-1KT誘導培養基中，培養20d，30d和40d時龍船花花藥愈傷誘導率均為最高，且40d時龍船花花藥愈傷誘導率達到最高73.06％。