[發明專利]一種高穩定性骨及骨腫瘤組織微陣列芯片及其制備方法

有效

• 申請號: 202110962631.1
• 申請日: 2021-08-20
• 公開（公告）號: CN113588375B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 陳鑫;楊江濤;劉蓓
• 申請（專利權）人: 中科光華（西安）智能生物科技有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/36;G01N1/31;G01N21/84
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 趙洋洋

本發明涉及一種高穩定性骨及骨腫瘤組織微陣列芯片及其制備方法，采用本發明的方法制備的骨及骨腫瘤組織微陣列芯片，較好的解決了芯片掉點和有效靶組織少及細胞變性等問題，本發明從物理學和平面排列及實用性角度綜合設計出最佳骨腫瘤組織芯片排列方式，節約了時間及成本，提高了組織芯片核心質量，在抗體研發、腫瘤研究和基因檢測等領域得到了廣大科研，臨床及教學機構的好評，基本滿足組織、蛋白、基因分子等領域腫瘤生物治療上對于靶向藥物的研發和腫瘤診斷及發生機制、轉歸所需要的對照組樣本需求，從而更快捷、便利、全面、嚴謹的提升科研水平。

技術領域

本發明屬于組織芯片技術領域，具體涉及一種高穩定性骨及骨腫瘤組織微陣列芯片及其制備方法。

背景技術

組織芯片也稱組織微陣列，是生物芯片技術的一個重要分支，是將許多不同個體組織標本以規則陣列方式排布于同一載體（使用載玻片最多）上，主要用于研究同一種基因或蛋白質分子在不同細胞或組織中表達的情況。該技術自1998年問世以來，以其大規模、高通量、標準化等優點得到大范圍的推廣應用。其最大優勢在于，芯片上的組織樣本實驗條件完全一致，有極好的質量控制。節省時間、節省試劑更是顯而易見的。

我國組織芯片制備技術日趨成熟，但是對于一些特殊組織，比如骨組織和骨腫瘤組織，由于其硬度大，脫鈣處理后酸度強，導致組織粘附性差，因此給制作高質量組織芯片造成較大難度，制作起來費時、費力，而且經常出現掉點、脫片現象，組織芯片質量差直接影響到后續實驗結果。另外，骨腫瘤組織芯片由于含量多，受組織脫鈣影響等原因，有效靶組織細胞少，經常會因為固定、脫鈣等前期組織處理不穩定因素而使細胞變性，導致組織芯片組織點內有效靶組織數量和質量得不到保障。

鑒于以上原因，特突出本發明。

發明內容

為了解決現有技術存在的以上問題，本發明提供了一種高穩定性骨及骨腫瘤組織微陣列芯片及其制備方法，本發明所述的芯片解決了芯片掉點和有效靶組織少及細胞變性等問題，節約了時間及成本，提高了組織芯片核心質量。

本發明的第一目的，提供了一種高穩定性骨及骨腫瘤組織微陣列芯片的制備方法，包括如下步驟：

（1）收集骨及骨腫瘤組織樣本，對所述的組織樣本進行處理；

（2）將處理后的組織樣本石蠟包埋，再進行切片HE染色，將HE染色片進行掃描；

（3）由病理醫生結合掃描圖在顯微鏡下診斷，標記有效靶組織，按照設計的組織微陣列及點徑大小制作組織芯片受體蠟塊，對照HE切片標記的有效靶組織區域，在供體蠟塊上打孔取樣，取出樣本柱芯埋放入受體蠟塊孔內，全部填埋完畢后，將組織微陣列蠟塊放置在57℃恒溫箱1.5h固蠟融合，然后室溫放置4h，轉入2-6℃下冷藏保存6小時以上，進行切片、烤片和HE常規染色，制成的所述的高穩定性骨及骨腫瘤組織微陣列芯片。

本發明的蠟塊選用萊卡蠟，熔點52℃-56℃。

進一步的，步驟（1）中所述的組織樣本進行處理具體為：將骨及骨腫瘤樣本固定于體積分數為10%福爾馬林溶液中24小時后再鋸取厚度為0.5cm骨片或帶骨腫瘤組織，然后在體積分數為10%的福爾馬林溶液中固定48小時，將骨或帶骨腫瘤組織置于脫鈣劑中直至骨組織容易被針刺透，進行脫水、透明、浸蠟、切片。

本發明中的脫鈣劑為含鹽酸脫鈣液，濃鹽酸15ml、氯化鈉7.5ml、蒸餾水加至100ml得到所述的脫鈣劑。每日需要更換新的脫鈣劑直至骨組織容易被針刺透，流水沖洗24小時去酸，然后進行下一步處理。

進一步的，步驟（3）中將組織微陣列蠟塊放置在57℃下1.5h固蠟融合，然后室溫放置4h，轉入4℃下冷藏保存6小時以上。

本發明人經過大量試驗發現，采用本發明的溫度和時間進行固蠟以及室溫放置，特定溫度冷藏，可以使得組織柱芯充分和受體蠟塊相容，避免點片脫落。

本發明中浸蠟過程具體如下：