[發明專利]一種血清和糞便中吲哚乙酸和吲哚丙酸的檢測方法

有效

• 申請號: 202110962369.0
• 申請日: 2021-08-20
• 公開（公告）號: CN113624888B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 宋月;王泉博
• 申請（專利權）人: 山東省分析測試中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王磊

1.一種血清和糞便中吲哚乙酸和吲哚丙酸的檢測方法，包括前處理和液相色譜質譜檢測，其特征在于：前處理步驟包括：

工序一：按比例配制甲醇：水：甲酸混合溶劑作為提取液，對糞便或血清樣品進行萃取得到萃取液；

工序二：將萃取液過已活化的Oasis?HLB固相萃取小柱進行凈化和富集，收集洗脫液進行測定；

所述工序一的具體過程為：糞便或血清樣品中加入吲哚乙酸-d5和吲哚丙酸-d2的混合內標溶液，再加入提取液進行超聲萃取，然后離心取上清液，再加入等量的提取液重復上述步驟，合并上清液得到萃取液；

甲醇：水：甲酸的體積比為(15-16)：(4-5)：(1-2)；

對糞便樣品進行萃取時，需要先在低溫密閉條件下進行研磨均質；在3-5℃下進行研磨；

當針對糞便進行萃取時，糞便與提取液的添加比為0.05g：1mL；當針對血清進行萃取時，血清與提取液的體積比為1：9；

所述液相色譜質譜檢測中，液相檢測條件為：

色譜柱：ACQUITY?BEH?C18，流動相A為0.1％甲酸水溶液，B為乙腈；

洗脫程序為：0～0.5min，10％B；0.5～2.0min，10％～95％B；2～3min，95％B；3～3.5min，95％～10％B；3.5～5min，10％B；

色譜柱的規格:2.1×50mm，1.7μm；進樣量1-3μL；流速0.1-0.3mL/min；

質譜檢測條件為：電噴霧離子源，正離子掃描ESI⁺，多反應監測MRM模式，毛細管電壓：2.5kV；離子源溫度：150℃；

脫溶劑氣溫度：250℃；錐孔氣流量：150L/hf；脫溶劑氣流量：600L/hf；吲哚乙酸定性離子對m/z?176.1/103，錐孔電壓25V，碰撞能20eV，定量離子對m/z?176.1/130，錐孔電壓25V，碰撞能20eV；吲哚乙酸-d5定性離子對m/z?181.1/106，錐孔電壓20V，碰撞能8eV，定量離子對m/z?181.1/134，錐孔電壓20V，碰撞能30eV；吲哚丙酸定性離子對m/z190/171.9，錐孔電壓30V，碰撞能19eV，定量離子對m/z?190/130，錐孔電壓30V，碰撞能10eV；吲哚丙酸-d2定性離子對m/z?192/55.9，錐孔電壓12V，碰撞能12eV，定量離子對m/z192/130，錐孔電壓12V，碰撞能16eV。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：甲醇：水：甲酸的體積比為15：4：1。

3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：所述萃取過程在超聲環境下進行，萃取時間為15-20min。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：工序二中取500-700μL萃取液，過已活化的Oasis?HLB固相萃取小柱進行凈化和富集。