[發明專利]波氏桿菌噬菌體培養基及培養方法

有效

• 申請號: 202110954497.0
• 申請日: 2021-08-19
• 公開（公告）號: CN113528464B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 李國強;李海超;劉美;張媛媛;孔德江;常世愷;劉榮飛;曹凱典
• 申請（專利權）人: 河南興華生物技術有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K35/76;A61P11/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及噬菌體培養技術領域，尤其涉及波氏桿菌噬菌體培養基及培養方法。本發明提供的培養基包括水和：多聚蛋白胨、酵母浸粉、胰蛋白胨、氯化鈉和檸檬酸鈉。該培養基能夠實現對波氏桿菌噬菌體的大規模、高密度培養。實驗表明，相對于其他組分組成的培養基，本發明提供的培養基能夠更有效的培養波氏桿菌噬菌體，獲得更高的放罐效價。

技術領域

本發明涉及噬菌體培養技術領域，尤其涉及波氏桿菌噬菌體培養基及培養方法。

背景技術

豬萎縮性鼻炎是一種慢性的呼吸道傳染病，由支氣管敗血波氏桿菌和/或產毒素多殺性巴氏桿菌感染導致的。支氣管敗血波氏桿菌單獨感染時，鼻腔病變較輕，如果支氣管敗血波氏桿菌和產毒素多殺性巴氏桿菌混合感染或繼發感染時，則鼻腔病變很重。該病全年均可發生，春、秋兩季發生較多，所有豬群都可感染，2-5月齡的豬只更易感染，以鼻甲骨萎縮和慢性鼻炎為特征。豬萎縮性鼻炎的死亡率不高，但患病豬生長遲緩，育肥時間會延長，種豬會攜帶病菌，喪失育種價值，這些都會給養豬場造成較大經濟損失。

隨著養豬生產的工業化和集約化程度的提高，豬萎縮性鼻炎發病率有增加趨勢，影響仔豬的生長發育。目前，對豬萎縮性鼻炎主要采用抗生素和磺胺類藥物治療，例如：肌肉注射鏈霉素、氨芐青霉素，或者用卡那霉素鼻腔噴霧。上述方法可以殺滅病菌，減輕病情。但抗生素的長期使用會使豬產生抗藥性，并易體內殘留藥物，所以用藥方案還有待改善。

近年來，研究表明波氏桿菌噬菌體可以特異性裂解波氏桿菌，從而起到消滅病原阻斷波氏桿菌相關疾病傳播的作用。但若要將波氏桿菌噬菌體應用于波氏桿菌感染導致疾病的治療中，則需要大量的波氏桿菌噬菌體。而噬菌體屬于病毒，其培養宿主為細菌，且不同噬菌體的生長特性差異較大，很難針對不同噬菌體采用同一方法進行高密度培養。

目前，對波氏桿菌噬菌體，特別是多殺性波氏桿菌噬菌體的培養技術仍存在缺陷，無法實現波氏桿菌噬菌體的高密度培養。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供波氏桿菌噬菌體培養基及波氏桿菌噬菌體的高密度培養方法。

本發明提供的培養基包括水和：多聚蛋白胨10～20g/L、酵母浸粉1～5g/L、胰蛋白胨5～15g/L、氯化鈉6g/L、檸檬酸鈉1～10g/L。

一些實施例中，培養基由水和多聚蛋白胨10～20g/L、酵母浸粉1～5g/L、胰蛋白胨5～15g/L、氯化鈉6g/L、檸檬酸鈉1～10g/L組成。

一些具體實施例中，所述培養基由水和多聚蛋白胨15g/L、酵母浸粉5g/L、胰蛋白胨12g/L、氯化鈉6g/L、檸檬酸鈉8g/L組成。

一些實施例中，所述培養基中還包括波氏桿菌，所述波氏桿菌的密度為3×10¹⁰cfu。本發明中，所述巴氏桿菌噬菌體為分離自豬的波氏桿菌噬菌體。所述巴氏桿菌為分離自豬的巴氏桿菌。

本發明所述的培養基在波氏桿菌噬菌體培養中的應用。

本發明還提供了一種波氏桿菌噬菌體的培養方法，其將波氏桿菌和波氏桿菌噬菌體接種于本發明所述的培養基，然后進行培養。

所述培養方法中，先接入波氏桿菌，培養后再接入波氏桿菌噬菌體；

接入波氏桿菌噬菌體時，所述波氏桿菌和波氏桿菌噬菌體的數量比為60：1；

所述培養的條件包括：接入噬菌體后，靜置30min，轉速100rpm、通氣12L/min、37℃、pH7.0培養10～15h。

本發明所述培養方法培養獲得的波氏桿菌噬菌體培養液。

本發明還提供了一種治療豬萎縮性鼻炎的藥物，其由所述的波氏桿菌噬菌體培養液制得。