[發明專利]提高重組人源膠原蛋白穩定性的凍干保護劑

有效

• 申請號: 202110954486.2
• 申請日: 2021-08-19
• 公開（公告）號: CN113717272B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 杜爾鳳;許喬林;黃建民;趙健烽
• 申請（專利權）人: 浙江諸暨聚源生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

本發明公開了一種提高重組人源膠原蛋白穩定性的凍干保護劑。所述的保護劑按重量份數計，以重組人源膠原蛋白為100份，由海藻糖500?2000份、聚乙烯吡咯烷酮(PVP?K30)100?500份和甘露醇100?200份組成。在重組人源膠原蛋白凍干過程中，添加凍干保護劑能夠明顯提高重組人源膠原蛋凍干粉在常溫下的穩定性，防止其純度和活性下降，制得的凍干粉可在常溫下長期放置。

技術領域

本發明屬于生物制品的保存技術領域，涉及一種提高重組人源膠原蛋白穩定性的凍干保護劑。

背景技術

重組人源膠原蛋白是基于人體皮膚膠原蛋白的原始基因序列，優化選擇其中水溶性強、生物活性高的部分進行密碼子優化和拼接重組，得到的全新的重組人源膠原蛋白序列。此類膠原蛋白的水溶性好，生物活性高，其性能優于動物源膠原蛋白，在生物醫用材料領域有著廣泛的應用前景。

由于重組人源膠原蛋白水溶液穩定性較差，且對熱敏感，所以一般采用冷凍干燥的方法制作成凍干粉，方便保存和使用。但是，凍干過程會引起重組蛋白天然結構的變性，這是因為重組膠原蛋白在水溶液中表面會形成一層水化層，干燥過程去除這一部分水化層的水會破壞蛋白表面的氫鍵結構。此外，凍干后的重組人源膠原蛋白需要冷凍或者冷藏保存，常溫(25℃)條件下保存容易發生降解，純度下降，這在一定程度上制約了重組人源膠原蛋白的應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提高重組人源膠原蛋白穩定性的凍干保護劑。該保護凍干劑能夠提高重組人源膠原蛋凍干粉在常溫下的穩定性，防止其純度和活性下降。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

提高重組人源膠原蛋白穩定性的凍干保護劑，按重量份數計，以重組人源膠原蛋白為100份，由以下組分組成：海藻糖500-2000份，聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)100-500份，甘露醇100-200份。

本發明所述的重組人源膠原蛋白由保藏編號為CGMCC?NO.5021的巴斯德畢赤酵母發酵產生，已在中國專利ZL?201110327865.5中充分公開。

優選地，所述的凍干保護劑，由以下組分組成：海藻糖1000份，聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)200份，甘露醇200份。

進一步地，上述的凍干保護劑的使用方法為：按比例稱取重組人源膠原蛋白、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)和甘露醇，加入注射水至完全溶解，采用0.22μm的濾膜除菌過濾，分裝于西林瓶中，然后放入凍干機進行冷凍干燥，得到重組人源膠原蛋白凍干粉。

與現有技術相比，本發明的顯著效果如下：

本發明通過對凍干保護劑配方合理搭配，添加保護劑海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮和賦形劑甘露醇。海藻糖可以提高玻璃態轉化溫度，它既能在冷凍過程中充當低溫保護劑，又能在干燥脫水過程中起到脫水保護劑的作用，保護蛋白表面的氫鍵結構。聚乙烯吡咯烷酮可形成耐熱性構架，減少熱輻射對重組人源膠原蛋白的影響，減緩蛋白在常溫下的降解。兩種保護劑對冷凍干燥的不同階段保護蛋白質的保護機制不同，聯合使用時對重組人源膠原蛋白具有協同保護作用。本發明的凍干保護劑可有效增強重組人源膠原蛋白對干燥和常溫不良環境的抵抗能力，降低了產品純度降解幅度，在常溫(25℃)下凍干粉的保質期可達一年，提高了產品的穩定性，解決了凍干粉必須低溫儲藏和運輸的難題，有利于該產品的推廣和應用。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步詳述。

下述實施例中，采用的重組人源膠原蛋白溶液的濃度為1wt.％，純度為100％。

實施例1

重組人源膠原蛋白凍干粉的制備方法，包括以下步驟：

1、準確稱取海藻糖為50g，聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)10g，甘露醇10g，加入300g注射用水溶解。