[發(fā)明專利]一種用于特異性檢測(cè)丙溴磷的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)日: 2021-08-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113624811A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭業(yè)民;孫霞;張梅;史孝杰;李發(fā)蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種用于特異性檢測(cè)丙溴磷的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器，其特征在于：所述的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器由適配體負(fù)載于復(fù)合材料Au@AgNPs/AuNPs@MWCNTs修飾鉑金電極的表面而成，用于電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)丙溴磷。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于特異性檢測(cè)丙溴磷的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器，其特征在于：所述丙溴磷適配體核苷酸序列如下所示5’-SH-AAGCTTGCTTTATAGCCTGCAGCGATTCTTGATCGGAAAAGGCTGAGAGCTACGC-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于特異性檢測(cè)丙溴磷的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器的制備方法，其特征在于：所述的制備方法如下：

S1.納米金多壁碳納米管（AuNPs@MWCNTs）的制備：將2.0 mg羧基功能化的多壁碳納米管加入到4 mL 1%聚乙烯亞胺溶液中（PEI），超聲分散；離心10 min以去除多余的PEI；然后用2 mL超純水將剩余的沉淀物重新分散，制備PEI功能化的MWCNTs；將1mL 納米金溶液（AuNPs）滴加到1mL制備的PEI功能化MWCNTs的溶液中，攪拌過(guò)夜;離心得到的黑色固體再分散于2 mL 磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）中，此時(shí)就得到AuNPs@MWCNTs溶液；

S2. 具有核殼結(jié)構(gòu)的納米金銀復(fù)合材料（Au@AgNPs）的制備：首先，將12 μL L-抗壞血酸（AA：100 mM）、3 μL 硝酸銀（AgNO3：100 mM）和15 μL氫氧化鈉（NaOH：100 mM）分別加入到2 mL制備好的AuNPs (15 nm)溶液中，將混合溶液的pH值調(diào)整為8.5左右；然后將上述溶液用磁力攪拌器緩慢勻速攪拌30 min，然后以1800 rpm離心20 min；除去上清液后，將剩余的液體重新分散到10 mL超純水中，此時(shí)完成一次添加；重復(fù)上述步驟再添加四次完成Au@AgNPs的合成；

S3. 傳感器的構(gòu)建

將珀金電極拋光，依次用無(wú)水乙醇和去離子水混合液超聲，用氮?dú)獯蹈桑? μL AuNPs@MWCNTs溶液修飾在預(yù)處理后的鉑金電極表面室溫下干燥；再將1 μL 0.01 M魯米諾滴在鉑金電極表面，室溫自然干燥；隨后在鉑金電極表面滴上1 μL Au@AgNPs溶液，在空氣中干燥；接著在鉑金電極表面滴上1 μL丙溴磷適配體傳感器，在空氣中干燥；然后將修飾的鉑金電極浸泡在0.5 %的BSA中阻斷非特異性位點(diǎn)，得到BSA/適配體/Au@AgNPs/魯米諾/AuNPs@MWCNTs/PE。

4.一種基于電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器檢測(cè)丙溴磷的方法，其特征在于：以權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器作為工作電極，飽和甘汞為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極組成三電極體系，樣品中的丙溴磷被定量捕捉到傳感器的表面，通過(guò)產(chǎn)生的發(fā)光信號(hào)用于檢測(cè)丙溴磷。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)丙溴磷的電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器的應(yīng)用，其特征在于，具體步驟為：

A1.含過(guò)氧化氫（H₂O₂）的PBS緩沖溶液的配制：用pH為9.0的0 .1mol/L的PBS 緩沖溶液配制含10 nM H₂O₂的PBS緩沖溶液

A2.不同濃度的丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取一定量的丙溴磷，用PBS（pH=7.4）配制10 μg/mL丙溴磷溶液，再將上述溶液稀釋得到一系列不同濃度的丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度范圍為100 fg/mL~1μg/mL

A3.傳感器條件的優(yōu)化：對(duì)適配體的濃度、PBS緩沖底液的pH值、丙溴磷與適配體的孵育時(shí)間分別進(jìn)行優(yōu)化；配制不同濃度的丙溴磷適配體，濃度范圍為1nM~10⁴nM；配制不同pH值含10 nM過(guò)氧化氫（H₂O₂）的PBS緩沖溶液，pH范圍為7.0~10.0；將丙溴磷與適配體的孵育時(shí)間控制在20分鐘到70分鐘范圍內(nèi)；通過(guò)對(duì)影響傳感器的相關(guān)條件進(jìn)行優(yōu)化得出最佳的實(shí)驗(yàn)條件，使適配體傳感器的性能得到最大程度的發(fā)揮

A4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將所述電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器置于步驟A2配制的不同濃度的丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)溶液中浸泡相同時(shí)間，使電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器結(jié)合丙溴磷，然后取出并淋洗，作為工作電極，飽和甘汞為參比電極，鉑絲電極為對(duì)電極組成三電極體系，以步驟A1中的含過(guò)氧化氫（H₂O₂）的PBS緩沖溶液為電解液在電化學(xué)發(fā)光工作站進(jìn)行測(cè)量；記錄發(fā)光強(qiáng)度-時(shí)間曲線，建立電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器結(jié)合丙溴磷的發(fā)光強(qiáng)度與丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)溶液中的丙溴磷濃度對(duì)數(shù)值的線性關(guān)系，得到相應(yīng)的線性回歸方程

A5.樣品中丙溴磷的檢測(cè)：所述樣品先經(jīng)過(guò)預(yù)處理再放入電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器浸泡相同時(shí)間，使電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器結(jié)合丙溴磷，然后取出并沖洗，作為工作電極，再采用步驟A4方法檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度，再根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出樣品中丙溴磷的濃度。