[發(fā)明專利]一種檢測(cè)番茄褐色皺果病毒的膠體金免疫試紙條及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110941685.X
• 申請(qǐng)日: 2021-08-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113564128B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李向東;閆志勇;馬華玉;牟修岐;田延平;耿超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;C12R1/91
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

1.一組雜交瘤細(xì)胞株，其特征在于，包括：分泌番茄褐色皺果病毒單抗雜交瘤細(xì)胞株FL447-14和分泌番茄褐色皺果病毒單抗雜交瘤細(xì)胞株FL447-16；所述分泌番茄褐色皺果病毒單抗雜交瘤細(xì)胞株FL447-14的保藏編號(hào)為CCTCC NO：C 2021207；所述分泌番茄褐色皺果病毒單抗雜交瘤細(xì)胞株FL447-16的保藏編號(hào)為CCTCC NO：C 2021208。

2. 單克隆抗體組合，其特征在于，所述單克隆抗體組合包括：?jiǎn)慰寺】贵wFL447-14和單克隆抗體FL447-16；所述單克隆抗體FL447-14由保藏編號(hào)為CCTCC NO：C 2021207的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生，所述單克隆抗體FL447-16由保藏編號(hào)為CCTCC NO：C 2021208的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生。

3.權(quán)利要求1所述的雜交瘤細(xì)胞株或權(quán)利要求2所述的單克隆抗體組合在制備檢測(cè)番茄褐色皺果病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

4.一種檢測(cè)番茄褐色皺果病毒的膠體金免疫試紙條，其特征在于，所述膠體金免疫試紙條包括底板，依次搭接固定于底板上的樣品墊、免疫膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙；

所述免疫膠體金墊是結(jié)合有膠體金顆粒標(biāo)記單克隆抗體FL447-14的金標(biāo)墊；

所述硝酸纖維素膜上沿樣品流動(dòng)方向依次設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線包被單克隆抗體FL447-16，所述質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG抗體；

所述單克隆抗體FL447-14由保藏編號(hào)為CCTCC NO：C 2021207的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生；所述單克隆抗體FL447-16由保藏編號(hào)為CCTCC NO：C 2021208的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的膠體金免疫試紙條，其特征在于，所述檢測(cè)線與質(zhì)控線之間相距6-6.5mm。

6.權(quán)利要求4或5所述的膠體金免疫試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH為6.0-6.5，向膠體金溶液中加入單克隆抗體FL447-14，使單克隆抗體FL447-14的終濃度為18-22μg/ml；混合均勻，室溫反應(yīng)35-45min，加入BSA溶液終止反應(yīng)，靜置20-40min，低速離心棄去凝聚的金膠粒沉淀，然后高速離心，棄去上清，沉淀物用金標(biāo)液復(fù)溶，制成含有膠體金顆粒標(biāo)記單克隆抗體FL447-14的免疫膠體金溶液；

（2）將步驟（1）制備的免疫膠體金溶液涂在金標(biāo)墊上，得到免疫膠體金墊；

（3）將單克隆抗體FL447-16和羊抗鼠IgG抗體分別點(diǎn)射于硝酸纖維素膜上，形成含有檢測(cè)線和質(zhì)控線的硝酸纖維素膜；

（4）在底板上依次搭接固定樣品墊、免疫膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙，即制備得到膠體金免疫試紙條。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述膠體金溶液按照如下方法制備：

將1%氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入新制備的1%枸櫞酸鈉溶液，繼續(xù)攪拌加熱至溶液出現(xiàn)紅色，繼續(xù)煮沸出現(xiàn)透明的橙紅色，保持沸煮7-10min，自然冷卻至室溫。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述膠體金溶液中的膠體金的粒徑為40 nm。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，免疫膠體金溶液涂在金標(biāo)墊上的涂覆量為2.5 μl /cm²。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，單克隆抗體FL447-16和羊抗鼠IgG抗體均稀釋至1mg/ml，用量均為0.7 μl/cm；然后點(diǎn)射于硝酸纖維素膜上，分別形成檢測(cè)線和質(zhì)控線。