[發明專利]谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307及其表面展示系統和構建方法

有效

• 申請號: 202110941639.X
• 申請日: 2021-08-17
• 公開（公告）號: CN113603755B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發明（設計）人: 鄭穗平;林珂瑞;韓雙艷;林影
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C07K14/34
• 分類號: C07K14/34;C07K14/435;C12N15/31;C12N15/12;C12N15/56;C12N15/62;C12N15/77;C12N9/26
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

1.一種谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307在構建表面展示系統中的應用，其特征在于：

所述的谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；

所述的表面展示系統是以谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307為錨定蛋白，將靶蛋白固定在谷氨酸棒桿菌細胞表面構成的谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統；

所述的靶蛋白為增強綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白或α-淀粉酶。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的編碼序列如SEQ?ID?NO:2所示。

3.一種谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統，其特征在于：是以權利要求1中所述的谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307為錨定蛋白，將靶蛋白固定在谷氨酸棒桿菌細胞表面構成的；

所述的靶蛋白為增強綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白或α-淀粉酶。

4.權利要求3所述的谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將編碼權利要求1中所述谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的基因克隆到表達載體的表達盒中，得到以谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307為錨定蛋白的表面展示表達載體；

(2)將靶蛋白的基因序列克隆到步驟(1)中得到的表面展示表達載體的谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的基因序列的上游，與所述谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的基因形成融合基因；

(3)轉化谷氨酸棒桿菌，然后根據表達載體上的篩選標記篩選陽性轉化子，即得到所述谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統。

5.根據權利要求4所述的谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統的構建方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(i)將編碼權利要求1中所述谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的基因、靶蛋白的基因和表達載體通過同源重組的方式，構建得到重組質粒；

(ii)將步驟(i)中得到重組質粒轉化谷氨酸棒桿菌，挑取陽性轉化子，得到所述谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統；

步驟(i)中所述的靶蛋白為增強綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白或α-淀粉酶；

所述的增強綠色熒光蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示；

所述的紅色熒光蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:17所示；

所述的α-淀粉酶的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:21所示；

步驟(i)中所述的表達載體為帶有卡那霉素抗性的谷氨酸棒桿菌表達載體。

6.根據權利要求5所述的谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統的構建方法，其特征在于：

步驟(i)中所述的表達載體為谷氨酸棒桿菌表達載體pEC-XK99e。

7.權利要求1中所述的谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307、編碼權利要求1中所述谷氨酸棒桿菌蛋白Ncgl1307的基因或權利要求3所述的谷氨酸棒桿菌細胞表面展示系統在制備淀粉酶中的應用，其特征在于：所述的淀粉酶為α-淀粉酶。