[發明專利]一種酶催化半合成羅漢果甜苷V的方法

有效

• 申請號: 202110937345.X
• 申請日: 2021-08-16
• 公開（公告）號: CN113652464B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 李偉;黃華學;賀進軍;黃俊;宋谷良;江小龍
• 申請（專利權）人: 湖南華誠生物資源股份有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00
• 代理公司: 北京中知星原知識產權代理事務所(普通合伙) 11868
• 代理人: 艾變開;王維佳

本發明涉及一種酶催化半合成羅漢果甜苷V的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將含有11?O?羅漢果甜苷V的底物和輔助底物投入緩沖溶液中，室溫攪拌至全溶，得底物溶液；(2)將羰基還原酶、葡萄糖脫氫酶和輔酶投入上述底物溶液中，保溫攪拌；(3)反應結束后調節pH值至堿性，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱，上柱畢，水洗至流出液為中性，再用醇洗脫，將醇洗脫液濃縮、真空干燥，得羅漢果甜苷V。本發明方法以11?O?羅漢果甜苷V為底物原料，采用了酶法輔酶再生，和外加試劑輔酶再生聯用的方式，降低成本，按照本發明方法所得羅漢果甜苷V收率和純度都高，反應條件溫和，不使用易燃易爆、有毒有害的化工溶劑滿足了工業化生產要求。

技術領域

本發明涉及羅漢果甜苷的半合成方法，具體涉及一種酶催化半合成羅漢果甜苷V的方法。

背景技術

羅漢果甜苷作為甜味劑是安全無毒的，在國家強制標準《GB2760食品添加劑使用標準》中規定，羅漢果甜苷可不限量用于各類食品。

羅漢果甜苷V(Mogroside V)，分子式：C₆₀H₁₀₂O₂₉，分子量:1287.43，是羅漢果中特有的一種葫蘆烷型四環三萜皂苷，是羅漢果中主要的甜味成分，屬低熱量、非營養、非發酵型的天然高倍甜味劑。

11-O-羅漢果甜苷V，又名：11-氧基-羅漢果甜苷V(11-oxo-Mogroside V)，分子式：C₆₀H₁₀₀O₂₉，分子量:1285.43，同樣是羅漢果中特有的一種葫蘆烷型四環三萜皂苷，同樣是一種天然甜味劑，但是其甜度低于羅漢果甜苷V。

11-O-羅漢果甜苷V與羅漢果甜苷V的四環三萜骨架、取代糖基的數目與位置完全一致，只是11位碳原子上的取代基不同，一個是羰基，一個是羥基。分子結構的細微差別，導致了兩者甜度的巨大懸殊：羅漢果甜苷V的甜度是蔗糖的300-400倍，而11-O-羅漢果甜苷V的甜度是蔗糖的50-60倍。

目前，羅漢果提取物產品質量規格的衡量標準，通常是以羅漢果甜苷V的含量作為指標(即：羅漢果甜苷V的含量越高，價值越高)，并未對11-O-羅漢果甜苷V的含量做限定和要求。因此，11-O-羅漢果甜苷V在羅漢果提取物中存在的有與無，多與少，都與產品的實際價值毫不相關。通常情況下，在羅漢果原料中，11-O-羅漢果甜苷V的含量大約是羅漢果甜苷V含量的10％～20％，除羅漢果甜苷V之外，它還是羅漢果總皂苷中含量最高的皂苷。因此通過有效的途徑，用11-O-羅漢果甜苷V作為起始原料，半合成羅漢果甜苷V具有重大意義。

發明人于2019年曾申請了如下兩篇與羅漢果甜苷V半合成有關的發明申請：

CN201910643082.4公開了《一種羅漢果甜苷V的半合成方法》，是以11-O-羅漢果甜苷V為原料，經催化加氫制得羅漢果甜苷V；

CN201910641262.9公開了《半合成羅漢果甜苷V的方法》，是以11-O-羅漢果甜苷V為原料，經硼氫化鈉或硼氫化鉀還原制得羅漢果甜苷V。

上述所有的化學半合成方法將中，葫蘆烷型四環三萜皂苷11位碳原子上的羰基還原為羥基的過程中，都有發生α、β異構的風險。而且作為食品添加劑，最好能使用更為安全的合成方法。如果采用生物酶催化還原制備羅漢果苷V，則無類似的風險。

目前尚無文獻公開報道將采用酶催化半合成羅漢果甜苷V的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，克服現有技術不足，提供一種收率高、工藝簡單、成本低廉、適宜于工業化生產的酶催化半合成羅漢果甜苷V的方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案如下：一種酶催化半合成羅漢果甜苷V的方法，包括以下步驟：

(1)將含有11-O-羅漢果甜苷V的底物和輔助底物投入緩沖溶液中，室溫攪拌至全溶，得底物溶液；