[發(fā)明專利]MMP-9納米抗體及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110926992.0
• 申請(qǐng)日: 2021-08-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113698486A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉亮;葉其狀;黃鐘;吳丹丹;鄭厚勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;C12N15/13;C12N15/70;A61K39/395;A61K45/06;A61P35/04;A61P35/00
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 黃志云

1.一種MMP-9納米抗體，其特征在于，所述MMP-9納米抗體為單域抗體，且所述單域抗體包括互補(bǔ)決定區(qū)CDR，所述互補(bǔ)決定區(qū)包括CDR1、CDR2、CDR3；

其中，所述CDR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.1～SEQ.ID No.5中的任一種，

所述CDR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.6～SEQ.ID No.9中的任一種，

所述CDR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.10～SEQ.ID No.14中的任一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP-9納米抗體，其特征在于，所述MMP-9納米抗體的互補(bǔ)決定區(qū)選自如下：

所述CDR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.1、所述CDR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.6、所述CDR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.10；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.2、所述CDR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.7、所述CDR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.11；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.3、所述CDR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.7、所述CDR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.12；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.4、所述CDR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.8、所述CDR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.13；和/或，

所述CDR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.5、所述CDR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.9、所述CDR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.14。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP-9納米抗體，其特征在于，所述單域抗體包括框架區(qū)FR，所述框架區(qū)包括FR1、FR2、FR3、FR4；

其中，所述FR1的氨基酸序列選自SEQ.ID No.15～SEQ.ID No.19中的任一種，

所述FR2的氨基酸序列選自SEQ.ID No.20～SEQ.ID No.24中的任一種，

所述FR3的氨基酸序列選自SEQ.ID No.25～SEQ.ID No.29中的任一種，

所述FR4的氨基酸序列選自SEQ.ID No.30～SEQ.ID No.34中的任一種。

4.一種MMP-9納米抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

通過(guò)對(duì)多個(gè)天然文庫(kù)大量測(cè)序比對(duì)分析，分別設(shè)計(jì)CDR區(qū)中CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸突變位點(diǎn)并合成CDRs突變引物；

提供合成得到的納米抗體模板序列，對(duì)所述納米抗體模板序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化并引入限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，得到優(yōu)化納米抗體模板序列；

將所述優(yōu)化納米抗體模板序列插入噬菌粒載體構(gòu)建重組噬菌粒，將所述重組噬菌粒進(jìn)行噬菌體展示后提取單鏈DNA，利用Kunkel突變法把所述CDRs突變引物與所述單鏈DNA進(jìn)行配對(duì)合成異源雙鏈DNA，并轉(zhuǎn)化至到大腸桿菌中培養(yǎng)得到噬菌體突變文庫(kù)；

用所述噬菌體突變文庫(kù)針對(duì)MMP-9進(jìn)行篩選、純化得到MMP-9納米抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的MMP-9納米抗體的制備方法，其特征在于，所述CDRs突變引物包括CDR1突變引物，CDR2突變引物和CDR3突變引物，

所述CDR1突變引物的堿基序列為SEQ.ID No.35所述SEQ.ID No.35為3’-TTAAGCTGTGCAGCATCTGGTWVCATTTYTNNCNNCNNCNNCATGGGTTGGTATCGTCAAGCA-5’；和/或，

所述CDR2突變引物的堿基序列為SEQ.ID No.36，所述SEQ.ID No.36為3’-AAAGAACGCGAATTAGTTGCCRSCATTRVCNNCGGTRSCANCACCWATTATGCGGATAGCGTGAAAG-5’；和/或，

所述CDR3突變引物的堿基序列為SEQ.ID No.37，所述SEQ.ID No.37為3’-CTGCAGTGTATTATTGTGCAGYGNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBNNBYWTNNBTATTGGGGTCAAGGTACTCAA-5’。