[發明專利]噬菌體VB_VpP_BT-1011、篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202110926065.9
• 申請日: 2021-08-12
• 公開（公告）號: CN113637645B
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: 王景峰;邱志剛;楊曉波;諶志強;李辰宇;王尚;薛斌;趙辰;張曦;高超
• 申請（專利權）人: 軍事科學院軍事醫學研究院環境醫學與作業醫學研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N1/20;C12Q1/18;C12Q1/70;A61K35/76;A61P31/04;C12R1/92;C12R1/63
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種噬菌體VB_VpP_BT?1011及其篩選方法，噬菌體VB_VpP_BT?1011保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2021年06月08日，保藏編號為CGMCCNo.22379，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，該噬菌體對耐藥副溶血弧菌具有很好的防治效果。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，更具體的說是涉及一種噬菌體VB_VpP_BT-1011及其篩選方法和應用。

背景技術

噬菌體是一類感染細菌的病毒，它常分離于污水或海水等自然環境樣本中，并且它具有嚴格的宿主特異性，只侵襲一種或幾種細菌，所以噬菌體對人類或動植物沒有感染性，也不會污染環境，安全性較高。噬菌體可以分為溫和噬菌體與烈性噬菌體兩大類，其中烈性噬菌體可以在短時間內造成敏感細菌裂解。在殺菌效果方面，烈性噬菌體能裂解細菌并具有指數增殖特征，能作為一種具有抗菌作用的生物消毒劑。由于噬菌體能夠在各種環境中識別和感染宿主細菌細胞，與此同時具有很高的特異性并且只在活菌中增殖。

副溶血弧菌存在廣泛，開放性傷口與該環境中的副溶血弧菌接觸可能導致傷口感染和危及生命的敗血病，同時該菌也常見于魚，蝦和貝類等海鮮產品中，攝入被副溶血弧菌污染的海鮮食物會導致胃腸道疾病，包括水樣腹瀉，腹部絞痛，惡心，嘔吐，發燒，頭痛或血性腹瀉等癥狀；臨床現治療相關疾病的方法是抗生素殺菌。但是，抗生素增加了抗生素耐藥性菌株(AMR)和耐藥基因的產生和傳播，進一步危及公眾的健康。所以，篩選出一株可以對抗耐藥性的副溶血弧菌的噬菌體是非常必要的。

因此，如何提供一種噬菌體VB_VpP_BT-1011，并將其應用于對抗耐藥性的副溶血弧菌的噬菌體中是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種噬菌體VB_VpP_BT-1011及其在對抗副溶血弧菌中的應用。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種噬菌體VB_VpP_BT-1011，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2021年06月08日，保藏編號為CGMCC No.22379，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

一種噬菌體VB_VpP_BT-1011的篩選方法，以副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)BTXS2對其進行篩選；所述副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2021年06月08日，保藏編號為CGMCC No.22677，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

作為本發明優選的技術方案，以副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)BTXS2對噬菌體VB_VpP_BT-1011進行篩選的具體過程包括：

1)取水樣，過濾、離心，截留濾液，得截留物；

2)以SM buffer洗脫截留物，并將洗脫液涂布至上層為副溶血弧菌BTXS2的3％Nacl LB雙層平板上，培養24h；

3)選取噬菌斑并轉移到SM buffer離心管中，離心，0.22μm濾膜過濾，得濾液；

4)將濾液梯度稀釋后與副溶血弧菌BTXS2混合，并傾注到3％Nacl LB雙層平板上，培養24h，選取噬菌斑；

5)重復步驟3)-4)，至獲得單一噬菌斑形態的純凈噬菌體。

作為本發明優選的技術方案，步驟1)中，所述過濾為以0.22μm濾膜過濾；所述離心為利用超濾離心管在4000rpm下離心10min；所述截留為以截留分子量為30KDa的生物膜截留。

作為本發明優選的技術方案，步驟3)中，所述離心為30000rpm下離心30min。