[發明專利]一種同時檢測若干種羊痘病毒屬病毒的LAMP引物組、試劑盒和檢測方法

有效

• 申請號: 202110921749.X
• 申請日: 2021-08-12
• 公開（公告）號: CN113373268B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 王林;程汝佳;韋海濤;程敏姮;張啟龍;栗云鵬;劉海瑩;宋彥軍;周德剛;趙浩軍
• 申請（專利權）人: 北京市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明提供了一種同時檢測若干種羊痘病毒屬病毒的LAMP引物組、試劑盒和檢測方法，涉及生物技術領域。本發明所述LAMP引物組和LAMP試劑盒，及開發的對應病毒檢測方法，通過熒光信息直接實現對山羊痘病毒、綿羊痘病毒和牛結節性皮膚病病毒的快速鑒定，具有便捷、準確、靈敏、特異、操作簡便等優點，最低檢測限在6 copies，高于實時熒光定量PCR的檢測結果，適于在疫情預爆發時現場快速診斷疫病，及時控制疫情。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種同時檢測若干種羊痘病毒屬病毒的LAMP引物組、試劑盒和檢測方法。

背景技術

山羊痘病毒（Goatpox Virus，GTPV）、綿羊痘病毒（Sheeppox Virus，SPPV）和牛結節性皮膚病病毒（Lumpy skin disease Virus，LSDV）屬于羊痘病毒屬病毒（Capripoxvirus，CPV），能分別引起山羊、綿羊和牛的皮膚、器官表面廣泛性結節和水腫，病畜產乳量急劇減少，皮毛品質極大下降，造成巨大經濟損失。

羊痘病毒（Capripoxvirus，CPV）在分類上屬于痘病毒科（poxviridae）脊椎動物痘病毒亞科（chordopoxrinae）中的羊痘病毒屬（capripoxvirus）。羊痘病毒為磚形病毒，在細胞漿內復制，其基因組為雙鏈DNA，大小約為290nm?270nm，屬于較小的痘病毒，病毒粒子由1個核心、2個側體和2層脂質外膜組成，羊痘病毒的衣殼為對稱型，有囊膜，囊膜內含有病毒特異性蛋白。

牛結節性皮膚病，是以患牛發熱、皮膚、勃膜、器官表面廣泛性結節，淋巴結腫大，皮膚水腫為特征的傳染病，能引起感染動物消瘦，產乳量大幅度降低，嚴重時導致死亡。山羊痘、綿羊痘和牛結節性皮膚病病毒具有很強的宿主特異性，自然條件下，不會發生交叉感染。

傳統的羊痘病毒屬檢測方法主要是血清學檢測（酶聯免疫吸附試驗ELISA 、微量中和試驗、間接免疫熒光和蛋白印跡試驗等）和病原學檢測（PCR、實時熒光定量 PCR和高分辨率熔曲線分析法等）。我國目前最常用檢測方法為熒光定量PCR，該檢測方法靈敏度和特異性較好，但操作復雜，儀器昂貴，難以在基層實際生產中普及應用。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種同時檢測若干種羊痘病毒屬病毒的LAMP引物組、試劑盒和檢測方法，可對羊痘病毒屬病毒進行快速、精確地檢測。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種同時檢測若干種羊痘病毒屬病毒的LAMP引物組，所述LAMP引物組包括外引物對、內引物對和環引物對；

所述外引物對包括F3和B3，所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述內引物對包括FIP和BIP，所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述環引物對包括LF和LB，所述LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

優選的，所述羊痘病毒屬病毒包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒和牛結節性皮膚病病毒。

本發明還提供了一種同時檢測若干種羊痘病毒屬病毒的LAMP試劑盒，包括上述LAMP引物組。

優選的，還包括熒光反應液和酶反應液；所述熒光反應液的組分包括：10×Thermopol buffer、MgSO₄、甜菜堿、dNTPs和熒光染料和上述LAMP引物組；

所述酶反應液包括Bst DNA聚合酶。

優選的，所述熒光染料包括SYTO9。