[發明專利]一種LncRNA TUG1靶向調控hsa-miR-4638-3p的方法

有效

• 申請號: 202110916986.7
• 申請日: 2021-08-11
• 公開（公告）號: CN114134174B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 王亞帝;何東寧;宋慧娟;陳素賢;譚琦;谷澤慧
• 申請（專利權）人: 錦州醫科大學附屬第三醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12N15/113;C12N15/53;C12Q1/66
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 張偉

本發明涉及一種LncRNATUG1靶向調控hsa?miR?4638?3p的方法，涉及生物技術領域。本發明的方法包括：步驟1、野生型或者突變型結合位點載體構建；步驟2、采用陽離子脂質體法進行細胞轉染；步驟3、對步驟2獲得的樣品進行Luciferase活性檢測。本發明采用螢火蟲/海腎雙熒光素酶報告系統進行靶標驗證，以確定LncRNATUG1與hsa?miR?4638?3p基因存在確切的靶標關系，該方法確定了LncRNATUG1和hsa?miR?4638?3p的靶向調控關系，為進一步研究它們在蒽環類藥物心臟毒性作用及分子機制奠定了實驗基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種LncRNA?TUG1靶向調控hsa-miR-4638-3p的方法。

背景技術

目前人類平均壽命逐年增加，但癌癥對人類的威脅日益突出，成為危害人類生命安全的重要疾病之一。隨著醫療技術的提高、抗腫瘤藥物研究的不斷發展及腫瘤綜合診治水平的提高，多種腫瘤以慢性病模式長期存在，腫瘤患者生存期延長的同時，抗腫瘤治療所引起的心血管毒性也與日俱增，尤以蒽環類藥物為代表。從長期來看，心血管疾病導致的死亡風險超過了多種腫瘤復發的風險；高齡、合并多種疾病以及需要長期或強化治療的患者，心血管的毒性風險增加。

lncRNA是一類長度大于200bp且不編碼蛋白質的RNA分子，由于功能和種類的不明確，長期以來被認為是不具蛋白編碼能力的無功能序列而未受到重視。然而，近年來的研究發現，lncRNA能夠在轉錄、轉錄后和翻譯等水平調控基因表達從而參與細胞的發育、分化、生長及凋亡等生物學過程。并且，越來越多的研究表明lncRNA在心臟發育和功能維持中具有重要作用。

牛磺酸調節基因1(taurine?up-regμLated?gene?1，TUG1)是一種在小鼠視網膜中發現的lncRNA，定位在22q12.2染色體上，參與血管生成、細胞耐藥等過程，還與人體腫瘤發生有關在人體正常細胞功能維持以及疾病發生過程中發揮關鍵作用。TUG1可調節細胞凋亡，抑制某些細胞系統的凋亡，如β細胞、膀胱癌細胞和肝細胞癌，但在其他細胞如晶狀體上皮細胞、神經元和膠質瘤中促進凋亡。但在受到炎癥刺激的H9c2心肌細胞中，TUG1抑制細胞凋亡和炎癥反應，而在缺氧條件下，TUG1促進細胞凋亡，加重缺氧所致的損傷，提示TUG?1的雙重作用與細胞類型和應激刺激有關。那么TUG1是否也可以通過作用于心肌細胞中或蒽環類藥物心肌損傷中的特定miRNAs來調節細胞死亡，TUG1參與蒽環類藥物心血管毒性的具體分子生物學機制仍有待進一步深入研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種LncRNA?TUG1靶向調控hsa-miR-4638-3p的方法，該方法確定了LncRNA?TUG1和hsa-miR-4638-3p的靶向調控關系，為進一步研究它們在蒽環類藥物心臟毒性作用及分子機制奠定了實驗基礎。

為了實現上述目的，本發明的技術方案具體如下：

本發明提供一種LncRNA?TUG1靶向調控hsa-miR-4638-3p的方法，包括以下步驟：

步驟1、野生型TUG1雙報告載體構建；

或者突變預測Hsa-miR-4638-3p第一結合位點載體構建；

或者突變預測Hsa-miR-4638-3p第二結合位點載體構建；

或者雙突變預測Hsa-miR-4638-3p結合位點載體構建；

第一結合位點的序列為：tgtccagg；

第一結合位點突變后的序列為：gagttcaa；

第二結合位點的序列為：tgtccag；

第二結合位點突變后的序列為：gagttca；

步驟2、microRNA與質粒共轉染細胞