[發明專利]檢測黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym的KASP引物及其應用

在審

• 申請號: 202110915013.1
• 申請日: 2021-08-10
• 公開（公告）號: CN113604596A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 吳志明;李亞棟;王鵬;田哲娟;康忱;趙雪芳
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院經濟作物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101
• 代理人: 田文其

1.檢測黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym的KASP引物，其特征在于所述的KASP引物序列包含：

正向引物zym-86-FT：5’-GCAATTACGCAAAAGCCTT-3’，其序列如SEQNo.1；

正向引物zym-86-FC：5’-GCAATTACGCAAAAGCCTC-3’，其序列如SEQNo.2；

反向引物zym-99-RC：5’-TTGAAGTACTCCAAGGCGTTC-3’，其序列如SEQ No.3；

反向引物zym-99-RT：5’-TTGAAGTACTCCAAGGCGTTT-3’，其序列如SEQ No.4；

所述正向引物zym-86-FT和正向引物zym-86-FC分別與不同的標簽序列相連接；

所述反向引物zym-99-RC和反向引物zym-99-RT分別與不同的標簽序列相連接。

2.根據權利要求1所述的檢測黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym的KASP引物，其特征在于合成所述的正向引物zym-86-FT和反向引物zym-99-RC時，在兩者5’端加上序列為：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’的標簽序列A，其序列如SEQ No.5；合成所述正向引物zym-86-FC和反向引物zym-99-RT時，在兩者5’端加上序列為：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’的標簽序列B，其序列如SEQ No.6。

3.根據權利要求1所述的檢測黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym的KASP引物，其特征在于所述的KASP引物序列為：

正向引物86-FT：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGCAATTACGCAAAAGCCTT-3’，其序列如SEQNo.7；

正向引物86-FC：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGCAATTACGCAAAAGCCTC-3’，其序列如SEQNo.8；

反向引物99-RC：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTTGAAGTACTCCAAGGCGTTC-3’，其序列如SEQ No.9；

反向引物99-RT：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTGAAGTACTCCAAGGCGTTT-3’，其序列如SEQ No.10。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的檢測黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym的KASP引物，其特征在于所述的KASP引物中還包括：

反向引物86-R：5’-CTTGGGATTTTTCTCATACTTCA-3’，其序列如SEQNo.11；

正向引物99-F：5’-CTATTGAATACGTGAAGCAGGC-3’，其序列如SEQ No.12。

5.用于檢測黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym的試劑盒，其特征在于包含權利要求1-4中任一項所述的KASP引物，其中正向引物86-FT、正向引物86-FC和反向引物86-R為一對KASP引物；反向引物99-RC、反向引物99-RT和正向引物99-F為一對KASP引物。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于其中還包含：

標簽序列A：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’，其序列如SEQ No.5；

標簽序列B：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’，其序列如SEQ No.6；

所述兩種標簽序列：標簽序列A和標簽序列B，分別與不同的熒光基團相連接，其特征在于標簽序列A與FAM熒光基因相連接，標簽序列B與HEX熒光基因相連接；

所述兩種標簽序列的互補序列均與BHQ淬滅基因相連接。

7.根據權利要求1-4中任一所述的KASP引物或權利要求要求5-6任一項所述的試劑盒在鑒定黃瓜小西葫蘆黃化花葉病毒病抗病基因zym中的應用。