[發明專利]基于RSV F蛋白融合前特異性抗體的雙抗體夾心ELISA方法及應用

在審

• 申請號: 202110913165.8
• 申請日: 2021-08-10
• 公開（公告）號: CN113567670A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 李雄雄;王婉;陳玥如;唐悅;王名強;王宇;傅生芳
• 申請（專利權）人: 蘭州生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 西安合創非凡知識產權代理事務所(普通合伙) 61248
• 代理人: 張翠華

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體涉及一種基于RSV F蛋白融合前特異性抗體的雙抗體夾心ELISA方法及應用，該雙抗體夾心ELISA方法可以更為準確地檢測RSV病毒滴度，同時提供直觀數據，其分別選擇融合前特異性抗體AM14作為包被抗體，選擇D25作為檢測抗體，包被抗體濃度為1000ng/孔，檢測抗體稀釋比例為1:3000。本發明建立的雙抗體夾心ELISA方法與人輪狀病毒、人3型副流感病毒以及牛血清均無交叉反應，特異性良好。本發明用該方法對不同稀釋倍數的RSV病毒進行多次重復試驗，結果證明該方法CV＜10%。本發明重復性、廣譜性、靈敏度良好，具有易操作，周期短的特點。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體涉及一種基于RSV F蛋白融合前特異性抗體的雙抗體夾心ELISA方法及應用。

背景技術

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus ,RSV)是一種引起嬰幼兒、老年人及免疫缺陷者呼吸道嚴重感染的病原體，發病率高，流行范圍廣。因目前沒有針對RSV感染的特異性預防措施，疫苗研發是當前的迫切需求。在疫苗研發過程中，病毒滴度檢測是評估新的疫苗候選株感染力和毒力的重要工具。

目前，RSV病毒滴度的常用檢測方法有CCID50,噬斑法、免疫熒光檢測法、ELISA方法、RT-PCR等，每種方法都有自身的優缺點，RT-PCR方法出現假陽性的概率較高，其他試驗需要專業的人員對病毒引起的細胞病變進行準確地判斷，ELISA方法作為檢測抗原的一種常用方法，易操作、周期短。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于RSV F蛋白融合前特異性抗體的雙抗體夾心ELISA方法及應用，為實驗室RSV病毒滴度檢測提供了一種更精確、高效的檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

基于RSV F蛋白融合前特異性抗體的雙抗體夾心ELISA方法，選擇融合前特異性抗體AM14作為包被抗體、融合前特異性抗體D25作為檢測抗體檢測RSV滴度。其中，所述包被抗體AM14濃度為1000ng/孔，檢測抗體D25稀釋比例為1:3000。

本發明所述的基于RSV F蛋白融合前特異性抗體的雙抗體夾心ELISA方法可以準確測定RSV滴度，同時提供直觀數據，可用于不同型別RSV病毒滴度的檢測。

本發明建立的雙抗體夾心ELISA方法與人輪狀病毒、人3型副流感病毒、牛血清無交叉反應，特異性良好。本發明用該方法對不同稀釋倍數的RSV病毒進行多次重復試驗，結果證明該方法CV＜10%；；用該方法檢測RSV A，B不同亞型，均具有較高的靈敏度，證明本發明可以檢測不同型別RSV病毒滴度。本發明也可以應用于重組RSV F蛋白的測定。

與CCID₅₀比較，本發明建立的雙抗體夾心ELISA方法具有更高的檢測靈敏度。本發明建立的雙抗體夾心ELISA方法具有良好的重復性、廣譜性和靈敏度，為實驗室測定RSV病毒滴度提供了一種高效、便捷的方法。

附圖說明

圖1為不同包被抗體的雙抗體夾心ELISA測定RSV滴度結果；

圖2 為不同濃度包被抗體的雙抗體夾心ELISA測定RSV滴度結果：圖中: A: 125ng/孔；B: 250 ng/孔；C: 500 ng/孔；D: 1000 ng/孔；

圖3 為不同濃度檢測抗體的雙抗體夾心ELISA測定RSV滴度結果：圖中： A:1:1000；B:1:2000；C:3000；D:4000；

圖4為雙抗體夾心ELISA方法特異性驗證結果：圖中：1： B亞型RSV；2：人輪狀病毒G1型；3：人3型副流感病毒；4：牛血清；5：陰性對照；

圖5為雙抗體夾心ELISA方法廣譜性試驗結果：

圖中：1：B亞型RSV；2：A亞型RSV；3：重組RSV F蛋白；4：陰性對照。

具體實施方式