[發明專利]一種提高卷曲乳桿菌類細菌素產量的發酵培養基及培養條件

在審

• 申請號: 202110910199.1
• 申請日: 2021-08-09
• 公開（公告）號: CN113564082A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 王艷;唐美;鄒俊娜;譚理文
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;C12R1/225
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 盛武生

本發明屬于微生物培養技術領域，具體公開了一種提高卷曲乳桿菌類細菌素產量的發酵培養基，其由乳清粉、葡萄糖和緩沖成分和水組成。此外，本發明還提供了一種利用所述的培養基改善卷曲乳桿菌類細菌素產量的方法。本發明研究發現，通過所述的成分比例的聯合控制，能夠意外地形成協同，能夠顯著改善卷曲乳桿菌類細菌素產量。

技術領域

本發明屬于微生物培養基技術領域，具體涉及一種能夠提高陰道卷曲乳桿菌菌發酵上清液中類細菌素產量的發酵培養基和培養條件。

背景技術

念珠菌性陰道炎(Vulvovaginal candidiasis,VVC)是一種以白色念珠菌為主要致病菌的常見婦科疾病，具有高發病率(75％)、高復發性(40％～50％復發一次，8％復發3次)以及非致命性等特點，成為困擾全球女性身體健康的一大難題。健康女性陰道是一個復雜的動態的微生態系統，由正常菌群和機會致病菌組成。正常菌群由卷曲乳桿菌、加氏乳桿菌、詹氏乳桿菌等乳桿菌占主導優勢，乳桿菌作為定植菌與機會致病菌(加德納菌、白色念珠菌、光滑念珠菌等)共同寄居于陰道粘膜，乳桿菌能產生乳酸、過氧化氫、細菌素等多種代謝產物，維持健康婦女陰道內pH值3.8-4.4的弱酸性，抑制致病菌的定殖、生長和繁殖。當由于激素、免疫力降低、抗生素等因素的影響，陰道菌群之間的生態平衡被打破，致病菌大量繁殖，導致念珠菌性陰道炎發生，臨床上常選用咪康唑、克霉唑和氟康唑等抗真菌唑類藥物進行治療。

近年來，推崇治療藥物聯合微生態制劑的治療方案，即使用藥物抑制或殺滅致病菌后，再通過局部用藥為陰道外源補充乳桿菌等益生菌，幫助陰道恢復由乳桿菌占主導優勢的正常菌群。但是白色念珠菌對于常用抗真菌藥物普遍出現多重耐藥性，藥物抑制或殺滅致病菌的效果很差，即使暫時治愈也容易復發；用藥時間長(抗真菌藥物治療后還需要用益生菌進行治療)，患者依從性較差；益生菌需要低溫才能保持其活性，保存條件要求高，否則乳桿菌等益生菌會因喪失活性而失效。

卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus，L.crispatus)是陰道內占主導優勢的一種重要的維持陰道生態環境的乳桿菌，在維持陰道微生態平衡上起著重要作用。已有大量研究證明，卷曲乳桿菌發酵上清液(CFS,Cell Free Supernatants)中存在一種熱穩定性好、對蛋白酶敏感、分子量較小的類細菌素抑菌物質，若提取CFS中的類細菌素作為VVC的治療藥物，既有利于解決抗真菌藥物產生的耐藥性問題，又避免了像益生菌保存條件苛刻的問題，同時還有利于重新建立陰道微環境的平衡，恢復乳桿菌的主導地位，降低VVC的復發率，理論上是一種安全、有效的治療復發性VVC的藥物。

目前普遍用于培養L.crispatus的是MRS培養基(蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、檸檬酸氫二銨、葡萄糖、吐溫80、乙酸鈉、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸錳)，MRS培養基有成熟的商業化產品。MRS培養基存在兩方面的問題：一是類細菌素產量低(抑制率在20％左右，Jang sungJae,et al.,Scientific Reports,2019,9:8121)；二是成分多，成本高，會導致生產類細菌素的成本過高，難以實現工業化生產。目前也有一些乳清培養基的文獻報道(①CN201410796931.7；②Sabrina S.Sabo,et al.,Journal ofDairy Science,2019,102(1):87-99)，但是這些乳清培養基的成分還是比較復雜，生產成本仍然較高。

發明內容

本發明第一目的在于，提供一種能夠提高卷曲乳桿菌類細菌素產量的發酵培養基，旨在通過所述的培養基的控制提高卷曲乳桿菌類細菌素產量。

本發明第二目的在于，提供一種能夠提高卷曲乳桿菌類細菌素產量的發酵方法。

一種提高卷曲乳桿菌類細菌素產量的發酵培養基，由乳清粉、葡萄糖和緩沖成分和水組成。

本發明提供了一種由乳清粉、葡萄糖和緩沖成分和水組成的封閉式液體發酵培養基，其能夠基于成分的協同，能夠意外地帶來提高曲乳桿菌類細菌素產量的效果。