[發(fā)明專利]一種甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育恢復(fù)基因Rfo

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110905957.0
• 申請日: 2021-08-09
• 公開（公告）號: CN113355453B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐順學(xué);易麗媛;田冰川;彭佩;肖金華;王同華;郭一鳴;李寶
• 申請（專利權(quán)）人: 華智生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 肖云

本發(fā)明公開了一種甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育恢復(fù)基因Rfo的SNP分子標(biāo)記及其應(yīng)用，所述SNP分子標(biāo)記為BN900009.K02，其中BN900009.K02的多態(tài)性為A或G，所述SNP分子標(biāo)記位于甘藍(lán)型油菜基因組BrassicanapusV4.1版本的A9號染色體的第5748820bp處。本發(fā)明方案利用所述分子標(biāo)記，可以快速準(zhǔn)確的檢測甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育恢復(fù)基因Rfo，利用分子標(biāo)記輔助選擇育種，簡單有效，可以降低育種成本，縮短選育周期，亦可進(jìn)行有目的的多基因聚合，提高育種效率，帶來巨大的社會經(jīng)濟(jì)效益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育恢復(fù)基因Rfo的SNP分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

油菜是繼大豆和油棕之后的第三大油料作物，也是主要食用油之一。雜種優(yōu)勢是自然界普遍存在的一種生物現(xiàn)象，表現(xiàn)為兩個親本間雜交子代的某些性狀優(yōu)于雙親，因此在油菜育種工作中被廣泛應(yīng)用。雄性不育系制種是甘藍(lán)型油菜雜交種生產(chǎn)的主要途徑。

Ougra CMS（蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育）最早是由在蘿卜(Raphanus sativus)中發(fā)現(xiàn)的，有學(xué)者將歐洲甘藍(lán)型油菜與Ougra CMS不育系雜交，并連續(xù)回交轉(zhuǎn)育成甘藍(lán)型油菜胞質(zhì)不育系，其不育性十分穩(wěn)定，是由細(xì)胞質(zhì)中線粒體嵌合基因orf138和一對隱性細(xì)胞核基因(rf/rf)共同控制。而Ougra CMS的恢復(fù)基因僅存在于蘿卜中，相關(guān)技術(shù)通過種屬間雜交及分子標(biāo)記輔助選擇等技術(shù)，將Ougra CMS的恢復(fù)系的恢復(fù)基因Rfo從蘿卜導(dǎo)入到油菜中，相關(guān)技術(shù)運(yùn)用圖位克隆的手段成功克隆出了恢復(fù)基因，并對攜帶有Rfo恢復(fù)基因的外源DNA片段定位，推動了Ogu-Rf體系廣泛地用于雜交油菜育種。

相關(guān)技術(shù)公布的分子標(biāo)記大多為SSR和CAPS標(biāo)記，需要進(jìn)行凝膠電泳檢測，檢測過程使用的核酸染料等試劑對環(huán)境及人體有危害，且自動化程度低檢測通量小，另外有時會出現(xiàn)非特異擴(kuò)增的情況，導(dǎo)致檢測結(jié)果無法準(zhǔn)備判斷，很大程度上限制了檢測效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出一種甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育恢復(fù)基因Rfo的SNP分子標(biāo)記。

本發(fā)明還提出用于檢測上述SNP分子標(biāo)記的引物組。

本發(fā)明還提出上述SNP分子標(biāo)記的檢測方法。

本發(fā)明還提出上述SNP分子標(biāo)記的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明的第一方面實(shí)施方式的SNP分子標(biāo)記，所述SNP分子標(biāo)記為BN900009.K02，其中BN900009.K02的多態(tài)性為A或G，所述SNP分子標(biāo)記位于甘藍(lán)型油菜基因組Brassica napus V4.1版本的A9號染色體的第5748820bp處。

根據(jù)本發(fā)明第二方面實(shí)施方式的用于檢測上述SNP分子標(biāo)記的引物組，所述引物組包括特異型性引物；所述特異性引物包括Primer Seq Allele X和Primer Seq AlleleY，所述Primer Seq Allele X的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Primer Seq AlleleY的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述Primer Seq Allele X的5’端連接FAM或HEX熒光序列，Primer Seq Allele Y的5’端分別連接FAM或HEX熒光序列。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述引物組在油菜基因型檢測中的應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明的第三方面實(shí)施方式的一種甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育恢復(fù)基因Rfo基因型的檢測方法，所述方法包括如下步驟：