[發明專利]高靈敏度的免疫檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202110904027.3
• 申請日: 2021-08-06
• 公開（公告）號: CN113791207A
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 蔣興宇;徐曉建;牟磊
• 申請（專利權）人: 南方科技大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/536;G01N33/58
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉燚

1.免疫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

提供待測樣本、捕獲抗體和檢測抗體，所述捕獲抗體偶聯于固態基質，所述檢測抗體標記有核酸探針；

將所述待測樣本、所述捕獲抗體、所述檢測抗體混合反應，使所述待測樣本中的待檢目標同時結合所述捕獲抗體和所述檢測抗體形成免疫復合物；

將所述免疫復合物與CRSIPR/Cas系統蛋白、報告核酸混合，封裝形成液滴，所述CRSIPR/Cas系統蛋白識別剪切所述核酸探針，并誘導產生對所述報告核酸的非特異性剪切，根據所述報告核酸的非特異性剪切結果進行檢測。

2.根據權利要求1所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述液滴的體積為(1～100)×10^-15L。

3.根據權利要求1所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述檢測抗體偶聯于微球，所述微球上標記有多個所述核酸探針。

4.根據權利要求1所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述固態基質為磁性粒子。

5.根據權利要求1所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述CRSIPR/Cas系統蛋白為Cas13a蛋白。

6.根據權利要求1至5任一項所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述液滴的封裝方法包括以下步驟：

提供油相、所述免疫復合物與所述CRSIPR/Cas系統蛋白及所述報告核酸的混合液；

以所述油相為流動相，以所述混合液為分散相，在壓力和/或剪切力的作用下封裝形成油包水的所述液滴。

7.根據權利要求6所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述油相還包括表面活性劑。

8.免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括：

捕獲抗體，所述捕獲抗體偶聯于固態基質，所述捕獲抗體用于特異性結合待檢目標；

檢測抗體，所述檢測抗體標記有核酸探針，所述檢測抗體用于特異性結合所述待檢目標，且所述捕獲抗體與所述檢測抗體針對所述待檢目標的不同表位；

報告核酸；

CRSIPR/Cas系統蛋白，所述CRSIPR/Cas系統蛋白用于特異性識別切割所述核酸探針，并產生非特異性剪切特性切割所述報告核酸。

9.根據權利要求8所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，還包括微流控芯片。

10.根據權利要求9所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述微流控芯片包括液滴形成區，所述液滴形成區用于形成(1～100)×10^-15L體積的液滴。