[發明專利]體外合成不同緊密程度的糖原狀α-葡聚糖的方法

有效

• 申請號: 202110900746.8
• 申請日: 2021-08-06
• 公開（公告）號: CN113481261B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 金征宇;柏玉香;劉佳林
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P19/18
• 分類號: C12P19/18;C12P19/08
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種體外合成不同緊密程度的糖原狀α-葡聚糖的方法，其特征在于，反應體系以磷酸鹽溶液為緩沖液，蔗糖為底物，以麥芽三糖為引物，并添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；所述蔗糖和麥芽三糖的摩爾比例為(400～8000):1，α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的添加量比例為1:(50～400)；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的添加量比例與糖原狀α-葡聚糖的疏松程度成正相關。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液中磷酸鹽濃度在160mM～240mM；所述蔗糖在反應體系中的濃度為200～300mM；所述麥芽三糖在反應體系中的濃度為0.03～0.6mM。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述蔗糖磷酸化酶的添加量為1～3U/mL。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述α-葡聚糖磷酸化酶的添加量為5～40U/μmol麥芽三糖；所述分支酶的添加量為1800～2200U/μmol麥芽三糖。

5.根據權利要求2～4任一所述的方法，其特征在于，反應體系中含有磷酸鹽緩沖液以維持pH＝6.5～7.5，將蔗糖和麥芽三糖添加至反應體系中，在50～55℃下保溫15～20min加入α-葡聚糖磷酸化酶，反應150～180rpm震蕩反應20～30min后加入蔗糖磷酸化酶和分支酶，在50～55℃下震蕩反應4～16h。

6.一種提升糖原狀α-葡聚糖疏松程度的方法，其特征在于，在以蔗糖為底物、麥芽三糖為引物的磷酸鹽反應體系中添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；所述蔗糖和麥芽三糖的摩爾比例為600:1；所述α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例為1:(50～400)；反應14～20h；糖原狀α-葡聚糖的疏松程度與α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的添加量比例成正相關。

7.一種提升糖原狀α-葡聚糖的半徑的方法，其特征在于，在以蔗糖為底物、麥芽三糖為引物的磷酸鹽反應體系中添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；所述蔗糖和麥芽三糖的摩爾比例為600:1；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例為1:(50～400)；反應14～20h。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述緩沖液中磷酸鹽濃度在160mM～240mM；所述蔗糖在反應體系中的濃度為200～300mM；所述麥芽三糖在反應體系中的濃度為0.03～0.6mM；所述蔗糖磷酸化酶的添加量為1～3U/mL。

9.一種同時調節糖原狀α-葡聚糖分子鏈疏松度和分子量大小的方法，其特征在于，在以蔗糖為底物、麥芽三糖為引物的磷酸鹽反應體系中添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例為1:(50～400)；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例為1:50，蔗糖濃度為240mM；麥芽三糖濃度與分子鏈疏松度成正相關，麥芽三糖的濃度與糖原狀α-葡聚糖分子量的對數成負相關：

Y＝-1.0428x+7.5152，其中y為以10為底的糖原狀α-葡聚糖的分子量的對數，x為麥芽三糖的濃度。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，調節麥芽三糖的濃度為0.03mM～0.6mM。