[發(fā)明專利]一種采用顯微注射處理柑橘木虱的方法

在審

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• 申請日: 2021-08-05
• 公開（公告）號: CN113693028A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權）人: 廣州威佰昆生物科技有限公司
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;A01G17/00;A01G22/60;A01G7/06;A01G13/00
• 代理公司: 廣州市專注魚專利代理有限公司 44456
• 代理人: 張志鵬

本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其是一種采用顯微注射處理柑橘木虱的方法，在對柑橘木虱卵進出預處理時，用水飽和的油涂覆在柑橘木虱卵表面直至將柑橘木虱卵完全覆蓋，保證柑橘木虱卵的活性，防止顯微注射過程中柑橘木虱卵的失水死亡，利用顯微操作器對經(jīng)過預處理后的柑橘木虱卵進行顯微注射，再將其與雙面膠一起放入到純水中進行培養(yǎng)，采用雙面膠對柑橘木虱卵的位置進行限定，方便實驗人員提取，且能夠保證柑橘木虱卵與純水的接觸面一定，培養(yǎng)效果更均勻，且采用顯微注射的方式對柑橘木虱卵進行轉移，孵化率更高，孵化后若蟲與九里香嫩葉的接觸面均勻，不存在若蟲交疊的現(xiàn)象，保證每只若蟲都有相同的成長環(huán)境，感染率更高，孵化效果更佳。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其是一種采用顯微注射處理柑橘木虱的方法。

背景技術

柑橘木虱屬于同翅目木虱科，主要危害柑橘、橙、柚和九里香等蕓香科植物，是一種全球廣泛分布的重要傳毒害蟲，柑橘木虱主要危害蕓香科植物的新芽嫩梢，成蟲分散在葉和嫩芽上吸食，若蟲群集在新梢、嫩芽和幼葉上為害，吸食芽梢汁液，被為害的嫩梢和嫩芽逐漸的萎縮枯干，新葉畸形易脫落，嚴重影響植物的生長，若蟲分泌的白色分泌物灑布在枝葉上也影響植物的光合作用，并有可能引發(fā)煤污病，為了對柑橘木虱進行進一步的研究，需要培育足夠多的柑橘木虱樣本，野外捕捉的方式費時費力且不穩(wěn)定性較大，所以現(xiàn)有的生物實驗室中大多采用人工培育的方式對柑橘木虱進行人工培養(yǎng)。

現(xiàn)有的柑橘木虱人工培養(yǎng)過程中，大多采用若蟲注射的方式實現(xiàn)柑橘木虱與九里香等飼養(yǎng)植株的接觸，若蟲注射時，實驗人員不容易保證注射若蟲的位置穩(wěn)定，不方便提取，且注射后的若蟲容易發(fā)生交疊現(xiàn)象，感染率不高，孵化率較低，實用性不佳。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種采用顯微注射處理柑橘木虱的方法，具有能夠保證柑橘木虱卵的活性，方便實驗人員提取，培養(yǎng)效果更均勻，孵化率更高，不存在若蟲交疊的現(xiàn)象，保證每只若蟲都有相同的成長環(huán)境，感染率更高，孵化效果更佳的優(yōu)點，以解決上述背景技術中提出的若蟲注射時，實驗人員不容易保證注射若蟲的位置穩(wěn)定，不方便提取，且注射后的若蟲容易發(fā)生交疊現(xiàn)象，感染率不高，孵化率較低，實用性不佳的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：一種采用顯微注射處理柑橘木虱的方法，包括以下步驟：

S1：新鮮柑橘木虱卵的收集操作，預先收集20只產(chǎn)卵期的雌性柑橘木虱，將雌性柑橘木虱放到九里香嫩芽段上，對雌性柑橘木虱進行持續(xù)觀察，自雌性柑橘木虱開始產(chǎn)卵起計算，產(chǎn)卵1天后對粘附在九里香嫩芽段上的新鮮柑橘木虱卵進行收集；

S2：對柑橘木虱卵進行預處理，將收集到的新鮮柑橘木虱卵進行排列，并將排列后的柑橘木虱卵轉移到雙面膠上，干燥處理1.5min后立即用水飽和的油涂覆在柑橘木虱卵表面直至將柑橘木虱卵完全覆蓋；

S3：柑橘木虱卵注射及注射后處理，在高倍倒置顯微鏡下，利用顯微操作器對經(jīng)過S2處理后的柑橘木虱卵進行顯微注射，注射過程結束后，保留注射過的柑橘木虱卵，將其與雙面膠一起放入到純水中進行培養(yǎng)，對純水中的柑橘木虱卵進行觀察；

S4：柑橘木虱卵嫁接，當觀察到柑橘木虱卵進入紅眼期時，將柑橘木虱卵從雙面膠上取下，去除柑橘木虱卵表面涂覆的油后，在高倍倒置顯微鏡下，將柑橘木虱卵均勻的排列在濕潤濾紙和九里香嫩葉的交接處，再將九里香的嫩葉部分躺倒放置在杯子里；

S5：九里香小苗處理，采用顯微鏡對柑橘木虱卵觀察3天，有若蟲孵化出即可將九里香小苗扶至直立，直至對柑橘木虱卵全數(shù)孵化。

優(yōu)選的，所述九里香嫩芽段的數(shù)量為5根。

優(yōu)選的，所述柑橘木虱卵與雙面膠一起純水培養(yǎng)的時長控制在3天。

優(yōu)選的，將柑橘木虱卵均勻的排列在濕潤濾紙和九里香嫩葉的交接處時，需保證孵化后若蟲的背腹面與濕潤濾紙和九里香嫩葉的交接處貼合。