[發明專利]一種干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法

有效

• 申請號: 202110895085.4
• 申請日: 2021-08-05
• 公開（公告）號: CN115128178B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 荊京;徐昕;單圓鴻;田甜;汪洋;陳佩杰
• 申請（專利權）人: 上海體育大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 呂姿穎

本發明屬于G01N30/00技術領域，更具體的涉及一種干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法。一種干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法，包括以下步驟：通過干血斑自動取卡器材將干血斑卡片從干血斑樣本盤取出置于解吸部位，進入LC?HRMS系統進行分離和檢測，完成。經本發明提供的干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法結合高效液相?高分辨質譜技術，在縮短時間前處理時間的同時提高檢測靈敏度，避免檢測過程中因為手動操作帶來的操作誤差對檢測準確度和靈敏度的影響。

技術領域

本發明屬于G01N30/00技術領域，更具體的涉及一種干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法。

背景技術

干血斑采樣技術，是一種將全血樣品收集在干血斑卡片上的采樣技術。與傳統靜脈采血相比，干血斑采樣技術具有操作簡便、取血量少、微創性，保存和運輸的簡易化，室溫下樣本的穩定性等優勢。近年來，干血斑與色譜質譜技術的聯用在興奮劑檢測領域引起了廣泛的關注和研究。

據WADA統計，興奮劑違規事件中近半數是合成類固醇類興奮劑違規，在世界體育運動中，睪酮是類固醇類興奮劑中常用的濫用物質。睪酮有多種形式和劑量，最廣泛的使用形式是肌內注射睪酮酯。十一酸睪酮酯也可以口服給藥。睪酮進入血液循環后吸收會減慢，從而產生長效作用。當口服或注射睪酮酯制劑后，該酯緩慢擴散到血流中，盡管酶解過程立即開始，但在血液中仍可檢測到一定比例的睪酮酯原型（非專利文獻1）。

雖然尿液長期以來是興奮劑檢測的主要基質之一，但在尿液中，睪酮酯則是以游離睪酮及其代謝物的形式存在，難以檢測到睪酮酯原型。目前，對尿液樣本中外部攝入的類固醇類興奮劑檢測的常規方法，存在檢測靈敏度較低，分析通量小以及檢測成本較高等問題。該類物質特有的化學結構使其質譜檢測靈敏度較差，目前多采用衍生后進行氣相色譜串聯質譜（GC-MS/MS）的方法對尿液樣本進行檢測，內源性類固醇興奮劑的外部攝入還需要同位素比質譜（IRMS）進行確證。但是，在血液樣本中可直接檢測外源性睪酮酯原型，一旦在血液樣本中檢測到睪酮酯的存在，即可確認其興奮劑違規。非專利文獻1中還通過血液樣本檢測睪酮酯可作為IRMS睪酮確證分析的補充。

現階段，已有公開的非專利文獻2公開了對干血斑樣本中睪酮酯進行檢測的研究，但是現階段的研究多采用傳統的干血斑樣本前處理方法，該方法是離線手動進行的，步驟繁瑣耗時且存在檢測靈敏度較低等問題。干血斑樣本分析的前處理方法可能是影響該技術發展和應用的主要因素之一。由于樣本體積有限以及高度復雜的樣本基質（包括溶血的血細胞以及高含量的可溶性和不溶性蛋白質等），這些都可能會影響對目標物的分析檢測。為了進一步提升干血斑樣本在類固醇酯物質中檢測的準確性和靈敏度，并且提升檢測效率，有必要建立一種高靈敏度、高通量的干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法。

非專利文獻如下：

【非專利文獻1】藥物檢測與分析（Drug?testing?and?analysis）；2015，7(11-12)：983-989；

【非專利文獻2】藥學與生物醫學分析雜志（Journal?of?pharmaceutical?andbiomedical?analysis）；2014，96：21-30；

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種干血斑樣本中多種類固醇酯的全自動檢測方法，包括以下步驟：

（1）通過干血斑自動取卡器材將干血斑卡片從干血斑樣本盤取出置于解吸部位；

（2）進行拍照確認干血斑準確位置；

（3）利用卡片夾固定步驟（1）中卡片上的干血斑，使解吸溶液流穿干血斑的限定區域以解吸分析物，內標溶液通過HPD泵隨解吸溶液一起通過干血斑，結束后再次拍照確認提取完成；

（4）解吸溶液進入在線固相萃取系統中，進行目標物凈化和富集；