[發(fā)明專利]一種絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的制備及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110893244.7
• 申請(qǐng)日: 2021-08-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113558070A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁建海;權(quán)晨曦;劉世巍;范簫藝;蘭嘉豪;禹建芳;陳徐回;劉曉敏;魏婕;程子芥;梅瀚
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏師范學(xué)院
• 主分類號(hào): A01N63/30
• 分類號(hào): A01N63/30;A01N63/50;A01P1/00;A61K36/07;A61P31/04;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 蘭州智和專利代理事務(wù)所(普通合伙) 62201
• 代理人: 張英荷

本發(fā)明提供了一種絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的制備方法，將絨毛栓菌發(fā)酵液中菌絲體濾出，菌絲體用二氯甲烷和甲醇等體積混合作為提取溶劑提取4~6次，合并提取液，濃縮得到菌絲體提取物浸膏，濾出菌絲體后的發(fā)酵液進(jìn)行減壓濃縮得到濃縮發(fā)酵液，將菌絲體提取物浸膏與濃縮發(fā)酵液混合后，用乙酸乙酯萃取6~8次，合并萃取液并減壓濃縮即得絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物。本發(fā)明絨毛栓菌乙酸乙酯提取物對(duì)金黃色葡萄球菌高度敏感，抑菌活性強(qiáng)，對(duì)金黃色葡萄球菌的最低殺菌濃度為0.0975~0.04875 mg/mL，可作為新型的天然金黃色葡萄球菌抑菌劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種絨毛栓菌提取物的制備，具體涉及一種絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的制備方法，本發(fā)明同時(shí)涉及該絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物作為金黃色葡萄球菌抑菌劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，其往往引起人類和動(dòng)物化膿性感染，不僅嚴(yán)重威脅著食品衛(wèi)生安全，而且在動(dòng)物生產(chǎn)上也具有嚴(yán)重的危害性。為了減少金黃色葡萄球菌帶來(lái)的危害，食品等方面普遍應(yīng)用各種合成抑菌劑，在預(yù)防感染的同時(shí)，各種抑菌劑的應(yīng)用也給人類健康帶來(lái)了新的問(wèn)題。近年來(lái)，人們對(duì)天然食品需求增加，天然抑菌劑也得到了研究者的廣泛關(guān)注。因此，從天然藥物中尋找有效抗金黃色葡萄球菌的物質(zhì)是近年來(lái)抑菌藥物研發(fā)的一個(gè)新方向。

高等真菌屬于“創(chuàng)造系數(shù)”很高的生物資源，它們?cè)陂L(zhǎng)期的進(jìn)化和環(huán)境適應(yīng)過(guò)程中，形成了復(fù)雜的化學(xué)防御機(jī)制，產(chǎn)生許多具有抗癌、抗炎、抑菌等生物活性的次生代謝產(chǎn)物，以此為科學(xué)家們提供了研究新型藥物的新思路。我國(guó)高等真菌資源豐富，正是尋找天然抑菌藥物的理想來(lái)源。絨毛栓菌（Trametes pubescens）又稱絨蓋干酪菌，屬多孔菌目，多孔菌科的一種，可引起木材腐朽，對(duì)木質(zhì)破壞力較強(qiáng)，腐朽蔓延較迅速，屬白色腐朽類型。其子實(shí)體一般中等大小，菌蓋覆瓦狀生長(zhǎng)于基物上，無(wú)柄，半圓形至扇形、貝形，木栓質(zhì)，蓋面白色或灰白色，有密而細(xì)的絨毛，環(huán)帶不明顯。生長(zhǎng)于楊、柳、樺、櫟、赤楊等闊葉數(shù)目倒木或伐木樁上，也生于枕木上。

2012年，司靜等研究了絨毛栓菌胞外酶的活性變化，為其工業(yè)生產(chǎn)利用奠定基礎(chǔ)。隨后，司靜等（2014年）發(fā)現(xiàn)絨毛栓菌菌絲體具有高效穩(wěn)定且能夠?qū)Χ喾N染料均有脫色作用，經(jīng)其降解的染料剛果紅代謝產(chǎn)物為萘胺，聯(lián)苯胺，聯(lián)苯和疊氮萘，對(duì)植物的毒性大大降低，也因此在偶氮染料廢水處理中具有廣闊的應(yīng)用前景。程亞剛等（2012年）利用絨毛栓菌發(fā)酵生產(chǎn)的漆酶可用于催化白藜蘆醇合成白藜蘆醇二聚體δ-viniferin。合力強(qiáng)等（2015年）研究了絨毛栓菌發(fā)酵液的化學(xué)成分，化合物類型涉及倍半萜、三萜、甾醇、環(huán)肽、木脂素、黃酮等。不過(guò)目前，絨毛栓菌發(fā)酵液提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制方面還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，為了充分挖掘絨毛栓菌發(fā)酵液次生代謝產(chǎn)物的巨大合成潛力，我們開(kāi)展了絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物作為金黃色葡萄球菌抑菌劑的研究工作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的制備方法；

本發(fā)明的另一個(gè)目的是絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物作為金黃色葡萄球菌抑菌劑的應(yīng)用。

一、絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的制備

本發(fā)明具有抑菌活性的絨毛栓菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的制備方法，包括以下步驟：

（1）絨毛栓菌母種的培養(yǎng)方法：選取幼嫩、健壯飽滿、無(wú)病蟲(chóng)的絨毛栓菌子實(shí)體，在無(wú)菌條件下消毒后，切取一塊組織，迅速移接至馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）平板中心，倒扣平板至室溫培養(yǎng)3~5天，待菌絲長(zhǎng)滿馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平面，即為絨毛栓菌母種。其中，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200g、葡萄糖20g、瓊脂18~20g、水1000mL、121℃滅菌30min后，置于平板備用。