[發明專利]一種黃瓜組織中葫蘆素C含量測定及無苦味黃瓜鑒定方法

有效

• 申請號: 202110890531.2
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113391006B
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 梁根云;毛建霏;劉小俊;李躍建;劉獨臣;房超;蔡鵬
• 申請（專利權）人: 四川省農業科學院園藝研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54;G01N30/72
• 代理公司: 成都為知盾專利代理事務所(特殊普通合伙) 51267
• 代理人: 楊宜付

1.一種黃瓜組織中葫蘆素C含量測定方法，其特征在于，包括黃瓜組織樣品制備步驟和超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨串聯質譜測定步驟；

所述黃瓜組織樣品制備步驟為：采集新鮮黃瓜組織樣品，在低溫條件下制備成粉，精確稱量所述粉至第一容器，向所述第一容器中加入甲醇后渦旋振蕩提取，靜置后經濾膜過濾，濾液稀釋后上機測定；

所述第一容器為離心管；

稱取0.500g黃瓜葉片粉末至5mL離心管中，加入2mL甲醇，在2000轉/分鐘的條件下渦旋振蕩?5?min，靜置后用0.22μm濾膜過濾，濾液稀釋十倍后上機測定；稱取0.100g黃瓜果實粉末至5mL離心管中，加入3mL甲醇，在2000轉/分鐘的條件下渦旋振蕩5?min，靜置后用0.22μm濾膜過濾，濾液稀釋十倍后上機測定；

所述超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨串聯質譜測定步驟中使用色譜柱為waters?ACQUITY?UPLC?BEH?C₁₈，規格為100mm×2.1mm，1.7μm；

所述超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨串聯質譜測定步驟中，流動相體系為：流動相A：0.1%甲酸和1mM甲酸銨，水相；流動相B：甲醇；

采用梯度洗脫，梯度洗脫條件為：0min，65%A；0~4min，40%~65%A；4-4.2min，10%~40%A；4.2~5min，10%A；5~5.1min，10%~65%A；5.1~6min，65%A；進樣量1μL；

所述超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨串聯質譜測定步驟中，質譜條件：加熱電噴霧離子源溫度為350℃；毛細管電壓3.5?kV；離子傳輸管溫度350℃；鞘氣流速35unit；輔助氣流速15?unit；?Full?MS/dd?MS2掃描模式；一級質譜分辨率為70000，二級質譜分辨率為17500。

2.根據權利要求1所述的黃瓜組織中葫蘆素C含量測定方法，其特征在于，所述黃瓜組織為葉片，采集新鮮黃瓜葉片，加入石英砂，使用液氮研磨成粉末狀。

3.根據權利要求1所述的黃瓜組織中葫蘆素C含量測定方法，其特征在于，所述黃瓜組織為果實，果實冷凍干燥后粉碎成粉末。

4.根據權利要求1所述的黃瓜組織中葫蘆素C含量測定方法，其特征在于，還包括建立數學模型的步驟：

將葫蘆素C用甲醇分別配制10.00?μg/mL、40.00μg/mL、100.00?μg/mL，200.00μg/mL、500.00μg/mL、1000.00?μg/mL?葫蘆素C標準工作溶液；

吸取配制好的不同濃度的葫蘆素C標準工作溶液各1?μL，按濃度由小到大的順序依次進行超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱高分辨串聯質譜測定；

建立線性回歸方程：

Y=2.77×10⁴X-3.12×10⁵，相關系數為0.996；

其中：Y代表分析物與內標峰面積的比值，X表示目標分析物的濃度。

5.一種基于權利要求1~4任一項所述黃瓜組織中葫蘆素C含量測定方法的無苦味黃瓜鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）檢測黃瓜葉片中葫蘆素C含量，檢測結果為0，則黃瓜植株所結果實為無苦味果實；

2）檢測黃瓜葉片中葫蘆素C含量，檢測結果不為0，則僅進一步檢測果實中的葫蘆素C；當檢測黃瓜果實中的葫蘆素C含量為0時，黃瓜果實為無苦味果實；當檢測黃瓜果實中的葫蘆素C含量不為0時，黃瓜果實為苦味果實。