[發明專利]一種富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法

有效

• 申請號: 202110889281.0
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113413337B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 榮紹豐;李茜茜;管世敏;袁亞濤;黃煜玲;蔡寶國
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: A61K8/9728
• 分類號: A61K8/9728;A61Q19/08;A61P29/00;A61P37/08;A61P17/00
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.一種富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法，其特征在于，在蕈菌凍干燥粉中加入細胞表面展示的殼聚糖酶、維生素 C 以及蒸餾水，控制溫度在 40-60℃、pH 值在5.5-6.5的條件下進行酶解提取，然后過濾和離心除去蕈菌殘渣，收集濾液，進一步微濾和超濾除掉表面展示的殼聚糖酶，得到蕈菌提取液；

所述的細胞表面展示的殼聚糖酶的制備方法為：取一支成功轉化入 IPTG 誘導型表面展示的殼聚糖酶載體的大腸桿菌，挑取單菌落，接種于含有 100μg/mL Kan 的 LB 培養基中，250rpm，37℃培養 12h 后，以 5%接種量接種于更大體積的相同的培養基中，繼續 37℃震蕩培養至 OD600 為 0.8 時，加入 IPTG 使其終濃度為1.0mM，繼續震蕩培養至 OD600為 1.8；于 4℃，12000g 離心 2min 收集菌體，然后將菌體重懸于去離子水中，加入含 DTT的 2×SDS 凝膠加樣緩沖液，95℃水浴 10min，12000g 離心 1min，取樣進行 SDS-PAGE 分析，將培養液冷凍離心后的菌體保存于 4℃冰箱備用；

所述的蕈菌包括糙皮側耳、猴頭菇和杏鮑菇中的至少一種。

2.如權利要求 1 所述的富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法，其特征在于，所述的蕈菌凍干燥粉、維生素 C 以及蒸餾水的比例為30~50g：0.02~0.06g：500mL。

3.如權利要求 1 所述的富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法，其特征在于，所述酶解提取的時間為4~6h。

4.如權利要求 1 所述的富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法，其特征在于，所述的離心的條件為：離心轉速3000~5000 轉/分鐘，離心時間 5~20 分鐘。

5.如權利要求 1 所述的富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法，其特征在于，所述的微濾采用 0.22μm 的濾膜，所述的超濾采用 1KDa 的濾膜。

6.如權利要求1~5中任意一項所述的富含麥角硫因和煙酰胺的蕈菌提取液的制備方法，其特征在于，所述的蕈菌提取液中的麥角硫因濃度為298.7~369.2mg/L，煙酰胺濃度為30.6~38.5 mg/L。