[發(fā)明專利]一種模擬基因擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110885962.X
• 申請(qǐng)日: 2021-08-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113528315A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祝天宇;李征;薛誠(chéng);朱娟;鄭子偉;原霖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京林電偉業(yè)電子技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京國(guó)謙專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11752
• 代理人: 肖應(yīng)國(guó)

本發(fā)明提供了一種模擬基因擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，使用本方法所述標(biāo)準(zhǔn)裝置對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)和校準(zhǔn)，所述標(biāo)準(zhǔn)裝置包括檢測(cè)端和電路板，所述檢測(cè)端包括標(biāo)準(zhǔn)光源；開(kāi)啟實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和標(biāo)準(zhǔn)裝置，設(shè)置所對(duì)應(yīng)的qPCR程序和校準(zhǔn)測(cè)試程序，標(biāo)準(zhǔn)裝置放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中；運(yùn)行所述qPCR程序，檢測(cè)端采集到實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的加熱模塊的溫度數(shù)據(jù)；所述標(biāo)準(zhǔn)裝置根據(jù)校準(zhǔn)測(cè)試程序采集到的溫度數(shù)據(jù)和預(yù)設(shè)的發(fā)光比例，控制發(fā)光亮度，從而模擬熒光基團(tuán)擴(kuò)增反應(yīng)的亮度變化；所述標(biāo)準(zhǔn)裝置的光亮變化被實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀所檢測(cè)，生成模擬熒光基團(tuán)擴(kuò)增反應(yīng)的檢測(cè)數(shù)據(jù)，最后根據(jù)所述檢測(cè)數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種模擬基因擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，并采用了分子診斷檢測(cè)的配套標(biāo)準(zhǔn)裝置。本發(fā)明還特別涉及一種分子診斷檢測(cè)儀器，尤其涉及實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的配套校準(zhǔn)裝置，還屬于分子診斷檢測(cè)儀器中的分子生物信息分析處理系統(tǒng)，同時(shí)涉及體外診斷檢測(cè)儀器中的各類體外診斷用試劑、試紙及其配套設(shè)備與耗材。

背景技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是用來(lái)監(jiān)測(cè)循環(huán)過(guò)程的熒光，與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)通過(guò)開(kāi)發(fā)的實(shí)時(shí)自動(dòng)分析軟件以標(biāo)準(zhǔn)曲線的形式顯示。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要是采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析。目前實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究、基因的多態(tài)性研究、藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的溫場(chǎng)模塊和光學(xué)系統(tǒng)需要通過(guò)監(jiān)測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)基因擴(kuò)增反應(yīng)前儀器參數(shù)的校準(zhǔn)和反應(yīng)過(guò)程中的實(shí)時(shí)監(jiān)控。

目前，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的溫場(chǎng)部分的物理監(jiān)測(cè)，但是，針對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的光路系統(tǒng)，則主要還是通過(guò)生物化學(xué)方法，缺乏完善的物理方法。常用的生物化學(xué)方法有：采用廠家提供的生物試劑測(cè)試盤(pán)或質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、核糖核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等對(duì)其熒光強(qiáng)度精密度、樣本精密度、熒光線性相關(guān)性和樣本線性相關(guān)性進(jìn)行檢測(cè)。這種生物化學(xué)方法具有以下幾個(gè)共性問(wèn)題：（1）采用這種方式的檢測(cè)實(shí)質(zhì)上是對(duì)儀器本身檢測(cè)結(jié)果的一種對(duì)照及判斷，不可追溯過(guò)程及相關(guān)參數(shù)，無(wú)法判斷結(jié)果的偏差是由溫控系統(tǒng)還是光路系統(tǒng)導(dǎo)致的。無(wú)法說(shuō)明實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的溫度和熒光對(duì)最終定量結(jié)果的影響關(guān)系，誤差多少及誤差來(lái)源等。（2）僅能夠針對(duì)孔與孔間的組合線性進(jìn)行測(cè)量，所得結(jié)果僅能代表熒光定量PCR儀孔與孔間的平均結(jié)果，不能代表單孔的線性。（3）不具備直接參數(shù)的溯源性。（4）所采用的試劑及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均屬于消耗品，只能單次使用，長(zhǎng)期使用成本高；同時(shí)，試劑及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一般需要存放在-80℃環(huán)境下才能保持其特性不發(fā)生改變，一旦取出后必須使用，不能反復(fù)凍融。

對(duì)于模塊加熱的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析儀計(jì)量性能的校準(zhǔn)，已有JJF1527-2015《聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》和醫(yī)藥行業(yè)規(guī)范YY∕T《1173-2010聚合酶鏈反應(yīng)分析儀》（以下均簡(jiǎn)稱規(guī)范）做出了明確規(guī)定，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀屬于一種定量PCR儀，可以參照規(guī)范執(zhí)行。對(duì)于光路系統(tǒng)的檢測(cè)，規(guī)范明確記載了采用質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或熒光染料標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行梯度稀釋來(lái)進(jìn)行樣本線性及熒光線性的檢測(cè)。規(guī)范中要求樣本線性是以系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（至少5個(gè)）擴(kuò)增Ct值與濃度對(duì)數(shù)值進(jìn)行線性回歸，計(jì)算其線性回歸系數(shù)。目前的標(biāo)準(zhǔn)品一般稀釋包括S1-S7 7個(gè)梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，也可以是5個(gè)或6個(gè)，每個(gè)梯度濃度有多個(gè)重復(fù)孔（比如6個(gè)孔），然后以這6個(gè)重復(fù)孔的平均Ct值作為這一濃度的Ct值結(jié)果。NTC是陰性對(duì)照，即沒(méi)有初始DNA，整個(gè)過(guò)程熒光發(fā)光信號(hào)理論值為0或很低的發(fā)光亮度，重點(diǎn)是不會(huì)發(fā)生變化。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行濃度稀釋的過(guò)程中，人為操作肯定會(huì)引入一定的誤差，誤差值有可能會(huì)比較大，直接影響到最終的檢測(cè)結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本公開(kāi)的目的在于至少部分地克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種模擬基因擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，用于對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)和校準(zhǔn)。

本公開(kāi)的目的還在于提供一種模擬基因擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，用于對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的光路系統(tǒng)和溫場(chǎng)同時(shí)進(jìn)行物理方法的檢測(cè)和校準(zhǔn)。