[發明專利]野生四合木愈傷組織誘導方法

有效

• 申請號: 202110885701.8
• 申請日: 2021-08-03
• 公開（公告）號: CN113396822B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 李興朝;賈建國;徐軍;王海軍;康瑞;張艷霞;王楊;王瑞剛
• 申請（專利權）人: 烏海市澤匯園林綠化工程有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 內蒙古欣洋瑞專利代理有限公司 15110
• 代理人: 劉永珍

本發明公開了一種野生四合木愈傷組織誘導培養基，包括1/2MS鹽、MES、吲哚丁酸IBA、蔗糖、瓊脂，所述1/2MS鹽、MES、吲哚丁酸IBA、蔗糖、瓊脂在培養基中的終濃度為2.3g/l、0.25g/l、3mg/l、10g/l和7g/l，并加入KOH調節pH到5.75?5.85。本發明還公開了一種野生四合木愈傷組織誘導培養方法，以四合木幼枝為外植體材料，75％酒精消毒1分鐘、10％的次氯酸鈉溶液處理16分鐘，再通過30％的過氧化氫溶液處理10分鐘，之后轉后培養基中，在16h光照/8h黑暗的培養條件下，1/2MS+3mg/L IBA誘導四合木外植體愈傷；通過以上消毒方式進行愈傷消毒和以上培養基愈傷培養，可以得到理想的愈傷組織，能夠為挽救四合木等類似瀕危物種提供一定的幫助。

技術領域

本發明涉及四合木愈傷組織誘導培養基及誘導方法，屬于植物培養領域。

背景技術

四合木（Tetraena mongolica Maxim）是蒺藜科（Zygophyllaceae）四合木屬的一種強旱生肉質葉矮小灌木。根據研究，四合木源于蒙古南大陸熱帶地區，距今7000萬年第三紀以前的殘遺植物，現在已經瀕臨滅絕，被稱為植物界的“大熊貓”。目前，野生四合木僅存在于我國內蒙古自治區鄂爾多斯高原西北部，庫布其沙漠以南、卓資山的山麓地帶，少量延伸到相鄰的烏達低山殘丘區。四合木的根系發達，可以很好的進行防風固沙，減少水土流失，所以四合木在荒漠植物中地位重要。由于四合木長期在嚴酷、惡劣自然生境中繁衍進化，有著如耐干旱、耐貧瘠等許多特殊的抗逆基因，因此四合木有著極大的科研價值。

沙漠環境惡劣，生長的植物種類并不多。四合木枝條的含油量很高，易燃燒，因此在當地成為了良好的木柴和牲畜飼料，曾經被人類大規模的砍伐。之后，由于城市建設，四合木和其他的荒漠植物的生存環境受到了極大的影響。目前，四合木被列為國家二級和內蒙古一級珍稀瀕危植物。

研究植物的繁育技術是保護珍稀瀕危植物的重要內容之一。無性繁殖技術，具有保持母株原有優良特性、提早開花結實和簡單易行、成本低等優點，對于保護四合木提供了有效的方法。目前，在四合木的無性繁殖方面，相關實驗報道相對很少。

植物進行無性繁殖時的生根方式有多種，扈順、周志剛等人利用扦插實驗發現四合木的生根方式為愈傷組織生根。這種生根方式中，需要先誘導生成愈傷組織后再生成不定根。只有生根，四合木才能在土壤中生存。扦插時幼枝上帶有葉片能大幅度提高根的生成，適量添加外源激素也會促進不定根的生成。

李天然等以四合木的莖尖、花芽為材料，在添加了0.5mg /L的2,4-D、0.1 mg/L6-BA、500 mg/L的水解酪蛋白、3%蔗糖的1/2MS培養基誘導出愈傷組織。何麗君等在他的基礎上對四合木的種子進行消毒培養出四合木的無菌苗。以其外植體進行離體培養，表明胚狀體的發生2,4-D和6-BA是不可缺少的。

植物組織培養過程中的染菌是制約組培育苗發展的主要因素，對于實驗和生產都有極大的影響。如果出現無菌操作不嚴格，無菌室雜菌含量過高，植株幼苗及外植體表面不完全消毒，培養瓶、接種工具滅菌時間短，消毒劑濃度低或放置時間過長，導致部分失效，接種人員自身的消毒不嚴等諸多情況，隨著時間的延長，均有造成培養基的污染的可能性。當組培瓶內感染雜菌后，常會出現不同形狀，色彩和大小的雜菌落。隨著菌落的不斷生長，雜菌在生長中會分泌的次生代謝產物及色素，使得培養基部分染色，同時，雜菌還會分泌毒素影響或殺死植物材料，造成嚴重的后果。

雖然組織培養的材料用無菌苗的效果最好，但是在實際實驗和日常生產中，由于一些特殊環境或者種子稀少等原因，也經常會使用野外材料。而野外植物表面，經常會攜帶大量微生物，需要把材料表面和組織內的各種微生物殺滅干凈而達到不影響外植體組織活力的。這對于植物外植體的消毒造成了極大的困難。

在利用野生植物作為外植體進行組培的試驗中，佘小涵利用70%的酒精溶液和0.1%的HgCl溶液對野外直桿藍桉莖段進行消毒，構建出植物快繁體系。但由于在本實驗期間，升汞被列為禁藥，所以不能用升汞消毒。