[發明專利]瀘定百合抗病相關基因CAT的EST-STS分子標記引物及其應用

在審

• 申請號: 202110885095.X
• 申請日: 2021-08-03
• 公開（公告）號: CN113564274A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 馬璐琳;王繼華;張藝萍;賈文杰;段青;杜文文;王祥寧;李慧敏
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 倪建娣

本發明屬于分子生物學及基因工程技術領域，具體的說是瀘定百合抗病相關基因CAT的EST?STS分子標記引物及其應用，應用該方法可以直接對不同百合資源進行百合鐮刀菌枯萎病抗性鑒定，不需要構建百合抗/感病雜交后代群體，省去了構建百合抗/感病雜交后代群體的繁瑣工作程序，且該分子標記來自EST，而EST序列保守性較高，在家族和種屬間的通用性比來源于非表達序列的標記(如SSR標記)更高，特別適用于遠緣物種間(如不同百合品系間)的比較鑒定研究，另外EST?STS分子標記開發簡單、快捷、費用低，相對于傳統的鑒定方法，其更高效。

技術領域

本發明屬于分子生物學及基因工程技術領域，具體的說是瀘定百合抗病相關基因CAT的EST-STS分子標記引物及其應用。

背景技術

百合為百合科百合屬多年生球根花卉，花姿優美，色彩艷麗，深受人們喜愛，是世界五大鮮切花之一，由百合尖孢鐮刀菌轉化型引起的百合鱗莖腐爛病是目前百合生產中危害最為嚴重的病害，且鐮刀菌病害發生后危害嚴重，對百合切花的產量、品質及市場價格影響很大。而且鐮刀菌是一類能引起多種作物根腐、莖腐的土傳真菌，很難進行有效防治。雖然在生產上可以通過物理或化學手段防治百合病害，但需要投入大量的人力、物力，且化學防治可能會對環境造成污染。

過氧化氫酶(Catalase,CAT)是一類廣泛存在于動植物和微生物體內的酶，是生物體內主要抗氧化酶之一，其生物學功能主要是催化分解細胞內的H2O2，防止細胞過氧化，提高植物體內抗氧化酶活性和抗氧化代謝的水平可以增強植物本身的抗性，CAT在病害防御、脅迫應答、延緩衰老等方面起著重要作用。大量研究表明CAT與植物的抗性相關。

現在市場上最常見的切花百合品種為東方百合品系，但東方百合對百合鐮刀菌枯萎病的抗性表現最差，而亞洲百合、LA百合以及部分中國野生百合等對百合鐮刀菌具有較強的抗性，有研究者已通過一些如RAPD、AFLP等分子標記對亞洲百合的鐮刀菌病害抗性進行了分析，但是現有技術方法在實踐的過程，需要構建百合抗/感病雜交后代群體，由于構建百合抗/感病雜交后代群體的工作程序繁瑣，導致鑒定的效率進度緩慢。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，解決現有技術方法在實際工作過程中，需要構建百合抗/感病雜交后代群體，由于構建百合抗/感病雜交后代群體的工作程序繁瑣，導致鑒定的效率進度緩慢問題，本發明提出的瀘定百合抗病相關基因CAT的EST-STS分子標記引物及其應用。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：瀘定百合抗病相關基因CAT的EST-STS分子標記引物，包括EST-STS分子標記引物，且一對所述EST-STS分子標記引物包括正向引物以及反向引物；

所述正向引物的核苷酸(DNA)序列號如下SEQ ID NO.1所示，且所述反向引物的核苷酸(DNA)序列號如下SEQ ID NO.2所示：

5’-aactacaattcgccgttct-3’(SEQ ID NO.1)；

5’-cgaggtactcctggtgc-3’(SEQ ID NO.2)。

瀘定百合抗病相關基因CAT的EST-STS分子標記引物的應用，該應用包括以下流程：

S1：準備EST-STS引物聚合酶鏈反應(PCR)擴增試劑、儀器設備以及EST-STS引物；

S2：按照DNA試劑盒說明書提取百合新鮮葉片DNA；

S3：取上一步驟適量DNA產物進行電泳以及紫外分光光度計檢測其純度和濃度；

S4：另取適量DNA產物進行稀釋后作為PCR反應模板并對EST-STS引物進行PCR擴增；

S5：PCR反應完成后，取適量PCR產物經電泳檢測后再通過凝膠成像系統拍照，觀察分析結果。