[發(fā)明專利]一種黃顙魚醛還原酶蛋白及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110884622.5
• 申請日: 2021-08-02
• 公開（公告）號: CN113564137B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李偉;孫文秀;楊龍
• 申請（專利權(quán)）人: 長江大學(xué)
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/53;C12N1/21;C12N15/70;C12P7/04;C12P7/22;C12P7/20;C12P7/18;A61K38/44;A61P39/02;C12R1/19
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 張璐

1.一種黃顙魚醛還原酶蛋白，其特征在于，所述黃顙魚醛還原酶蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種編碼權(quán)利要求1所述的黃顙魚醛還原酶蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示。

3.一種載體，其特征在于，所述載體中包含如權(quán)利要求2所述的基因。

4.一種細胞，其特征在于，所述細胞中包含如權(quán)利要求3所述的載體。

5.如權(quán)利要求1所述的黃顙魚醛還原酶蛋白的制備方法，其特征在于，所述方法包括：提取黃顙魚肝臟組織總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后采用如SEQ?ID?NO.3-4所示的引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物與表達載體連接并轉(zhuǎn)化至受體細胞中，然后誘導(dǎo)所述受體細胞表達并純化，得到所述黃顙魚醛還原酶蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述方法具體包括：

步驟1、提取黃顙魚肝臟組織總RNA，利用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，采用SEQ?ID?NO.3-4所示的引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物經(jīng)回收、純化后得到黃顙魚醛還原酶蛋白的編碼基因片段；

步驟2、將步驟1的基因片段與載體pET-28a(+)同時進行EcoRI和Hind?III雙酶切，經(jīng)回收、純化、連接后，構(gòu)建得到原核表達載體pET-AKR1A1；

步驟3、將所述原核表達載體pET-AKR1A1轉(zhuǎn)化至E.coli?BL21(DE3)受體細胞中，涂布于含卡那霉素平板上進行抗性篩選，并經(jīng)菌落PCR驗證及SDS-PAGE電泳檢測獲得陽性表達菌株；

步驟4、將上述陽性表達菌株接種至含有卡那霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用IPTG進行誘導(dǎo)表達；

步驟5、誘導(dǎo)表達后的菌液離心收集菌體，菌體經(jīng)超聲破碎后離心收集沉淀，將沉淀用平衡緩沖液溶解，收集上清，加至Ni離子親和柱中，結(jié)合后洗脫，獲得純化的黃顙魚醛還原酶重組蛋白。

7.如權(quán)利要求1所述的黃顙魚醛還原酶蛋白，或如權(quán)利要求3所述的載體，或如權(quán)利要求4所述的細胞在還原醛類和/或酮類物質(zhì)中的應(yīng)用；所述醛類物質(zhì)選自：苯甲醛、鄰苯二甲醛、甲醛、甲酸、戊二醛、甘油醛、丙酮醛；所述酮類物質(zhì)選自：2,3-丁二酮、2,3-戊二酮。

8.如權(quán)利要求1所述的黃顙魚醛還原酶蛋白，或如權(quán)利要求3所述的載體，或如權(quán)利要求4所述的細胞在制備預(yù)防或治療重金屬鎘引起的組織損傷藥物中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述黃顙魚醛還原酶蛋白具有抑制IL-1β和細胞凋亡因子capase3a的表達，促進細胞因子IL-10表達，提高過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性，以及提高抗氧化能力的作用。