[發明專利]一種雙靶點mRNA疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 202110876695.X
• 申請日: 2021-07-31
• 公開（公告）號: CN113577258A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 劉明錄;盧永燦;馮建海;強邦明;王立新;韓慶梅;金海鋒;王亮;許淼
• 申請（專利權）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K9/127;A61K47/24;A61K47/28;A61P35/00;C12N15/12
• 代理公司: 山東華君知識產權代理有限公司 37300
• 代理人: 武歡歡

本發明提供一種雙靶點mRNA疫苗，包括脂質體混合物和雙靶點mRNA；所述脂質體混合物，包括DLin?MC3?DMA、DSPC、膽固醇、PEG200?DMG，摩爾比為50:10:37.5:2.5；所述雙靶點mRNA由線性化的重組質粒轉錄得到；所述重組質粒包含目的基因片段；所述目的基因片段由以下模塊依次串聯得到：5′–UTR核酸人工序列、P53核酸人工序列、Linker核酸人工序列、Kras核酸人工序列、MITD核酸人工序列、3′–UTR核酸人工序列；本發明還提供上述疫苗的制備方法；本發明制備的mRNA疫苗，能夠阻滯mRNA的遷移，并保護mRNA不被降解，提高了mRNA的遞送效率。

技術領域

本發明涉及一種雙靶點mRNA疫苗及其制備方法，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

腫瘤疫苗是用腫瘤細胞、腫瘤細胞裂解物或腫瘤抗原來激活機體免疫系統產生特異性抗腫瘤細胞免疫反應的一種治療性的腫瘤治療方法，包括全細胞疫苗、多肽類疫苗、RNA/DNA基因疫苗和樹突狀細胞疫苗。其中，mRNA疫苗作為一種新型的核酸疫苗，能夠表達任何蛋白質，可以從基因水平上治療幾乎所有基于蛋白質的疾病。相較于其他傳統疫苗和DNA疫苗技術，mRNA疫苗的合成不僅生產工藝簡單，且價格低廉。同時這種人為設計的核酸并不會誘發人體的免疫反應，不進入細胞核，無整合到基因組的風險，相對更安全。但mRNA自身穩定性差、易被體內外的核酸酶降解、穿透細胞膜能力較差是制約其發展的瓶頸。因此，mRNA疫苗需要有合適的遞送載體將其遞送至體內，才能有更好的免疫反應。

目前，腫瘤mRNA疫苗使用最廣泛是陽離子脂質和聚合物為基礎的納米制劑技術，可保護核酸藥物免遭核酸酶的降解，成功實現包括siRNA、mRNA、Cas9質粒等核酸藥物在體內的穩定遞送。陽離子脂質納米顆粒（LNPs）由陽離子脂質、聚乙二醇（PEG）、膽固醇等組成，包裹著核酸藥物被細胞膜內吞進入細胞內形成內體囊泡，伴隨著一系列的結構變化，促使mRNA從內體中解脫出來并與負責生產蛋白的核糖體結合，指導病毒蛋白的合成。LNPs具有良好的生物相容性和理化性質，在體內外均展現了較高的基因轉染效果，被證明是最安全的藥物遞送載體。已有被FDA批準上市的RNA藥物（Patisiran注射液）用于在體內遞siRNA或其他小寡核苷酸，但用于mRNA疫苗遞送的材料還非常有限。由于mRNA易被降解及自身物理化學特征，現有的納米材料對于mRNA遞送效率有限，以mRNA為基礎的腫瘤疫苗的發展與臨床應用仍面臨許多問題。因此，亟需開發一種新的治療方法來實現mRNA的有效遞送及編碼抗原的高效表達。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明提供一種雙靶點mRNA疫苗及其制備方法，實現以下發明目的：

（1）本發明制備的mRNA疫苗，包封率高；

（2）本發明制備的LNP脂質體能夠阻滯mRNA的遷移，并保護mRNA不被降解；提高細胞的轉染效率；

（3）本發明mRNA疫苗產生的抗體蛋白高于裸露mRNA；

（4）本發明mRNA疫苗能夠有效地誘導T細胞產生免疫應答；

（5）本發明mRNA疫苗對腫瘤細胞的殺傷率高。

為解決上述技術問題，本發明采取以下技術方案：

一種雙靶點mRNA疫苗，包括脂質體混合物和雙靶點mRNA；所述脂質體混合物，包括DLin-MC3-DMA、DSPC、膽固醇、PEG200-DMG，摩爾比為50 : 10 : 37.5 : 2.5；