[發(fā)明專利]核酸稀釋液

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110872095.6
• 申請(qǐng)日: 2021-07-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113564231B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王新濤;蔣威;鄭靜;肖嘯;杜增民;王利群;趙陽(yáng);吳俠;陳晨;鄭浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 信念醫(yī)藥科技（蘇州）有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851
• 代理公司: 上海華誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31300
• 代理人: 徐穎聰

本公開(kāi)涉及一種核酸稀釋液，包含1×TE、F68和選自下組的DNA：Lambda DNA、pUC19質(zhì)粒DNA、pUC18質(zhì)粒DNA、pBR322質(zhì)粒DNA、變性魚(yú)精DNA、pUC57質(zhì)粒DNA、pTZ19R DNA、大腸桿菌DNA以及sssDNA。本公開(kāi)的核酸稀釋液可用于定量PCR中標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的稀釋，具有保護(hù)和穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的作用。本公開(kāi)還涉及用該核酸稀釋液制備的標(biāo)準(zhǔn)品溶液以及使用該標(biāo)準(zhǔn)品溶液的定量PCR方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開(kāi)屬于生命分析領(lǐng)域。具體地，本公開(kāi)涉及一種核酸稀釋液，其可用于定量PCR中標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的稀釋。本公開(kāi)還涉及用該核酸稀釋液制備的標(biāo)準(zhǔn)品溶液以及使用該標(biāo)準(zhǔn)品溶液的定量PCR方法。

背景技術(shù)

定量PCR是一種可測(cè)定PCR產(chǎn)物量的方法，可在寬的濃度范圍內(nèi)以高精度定量樣品的初始模板拷貝數(shù)或濃度。定量PCR具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，在生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，比如基因的差異表達(dá)分析、SNP檢測(cè)、等位基因的檢測(cè)、藥物開(kāi)發(fā)、臨床診斷、轉(zhuǎn)基因研究等得到了廣泛的應(yīng)用。

定量PCR分析法利用梯度稀釋的一組標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立Ct值與濃度之間的線性關(guān)系。得到待測(cè)樣品的Ct值后，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線可以換算出待測(cè)樣品的量。通常，用水或者TE作為稀釋液來(lái)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋或?qū)Υ郎y(cè)樣品進(jìn)行稀釋。但是，這樣制備得到的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品(特別是低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品)往往不穩(wěn)定，無(wú)法長(zhǎng)期保存。使用傳統(tǒng)稀釋液稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品在制備后僅幾個(gè)小時(shí)就會(huì)失效，因此需要在每次定量PCR實(shí)驗(yàn)前新鮮配制稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。

因此，為了使稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品和/或樣品能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定存儲(chǔ)，需要獲得具有穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)品和/或樣品作用的稀釋液。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，在第一方面，本公開(kāi)提供一種核酸稀釋液，包含1×TE、F68和選自下組的DNA：Lambda DNA、pUC19質(zhì)粒DNA、pUC18質(zhì)粒DNA、pBR322質(zhì)粒DNA、變性魚(yú)精DNA、pUC57質(zhì)粒DNA、pTZ19R DNA、大腸桿菌DNA以及sssDNA(minus-strand strong-stopDNA)。該核酸稀釋液可作為標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的稀釋液，具有保護(hù)和穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的作用。用該稀釋液稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)存儲(chǔ)而不會(huì)失效。

在一個(gè)實(shí)施方式中，F(xiàn)68的濃度為0.001-0.05％，優(yōu)選0.002-0.04％，更優(yōu)選0.003-0.03％。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，F(xiàn)68的濃度為0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.035％、0.04％、0.045％或0.05％。當(dāng)F68在上述濃度范圍內(nèi)時(shí)，可以提供更好的保護(hù)和穩(wěn)定作用。

在一個(gè)實(shí)施方式中，DNA的濃度為3-30ng/μl，優(yōu)選4-25ng/μl，更優(yōu)選5-20ng/μl。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，DNA的濃度為3ng/μl、4ng/μl、5ng/μl、6ng/μl、7ng/μl、8ng/μl、9ng/μl、10ng/μl、15ng/μl、20ng/μl、25ng/μl或30ng/μl。當(dāng)DNA在上述濃度范圍內(nèi)時(shí)，可以提供更好的穩(wěn)定效果，有利于降低標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的在容器上的吸附損失。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，DNA為L(zhǎng)ambda DNA。

在第二方面，本公開(kāi)提供一種標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液通過(guò)用上述核酸稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品原液獲得，所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度低于標(biāo)準(zhǔn)品原液。

在一個(gè)實(shí)施方式中，標(biāo)準(zhǔn)品為用于DNA樣品定量的標(biāo)準(zhǔn)品或用于RNA樣品定量的標(biāo)準(zhǔn)品。在一個(gè)實(shí)施方式中，用于DNA樣品定量的標(biāo)準(zhǔn)品選自基因組DNA、質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方式中，用于RNA樣品定量的標(biāo)準(zhǔn)品選自體外轉(zhuǎn)錄RNA、PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒。