[發明專利]一種來源于黑孢塊菌的耐鋅鎘基因TmZRC1S及應用

在審

• 申請號: 202110871650.3
• 申請日: 2021-07-30
• 公開（公告）號: CN113736798A
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 王麗娟;姚泉洪;彭日荷;韓紅娟;田永生;高建杰;許晶;付曉燕;王波;李振軍;張福建;張文慧;鄧永東;王宇
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/84;C07K14/37;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種來源于黑孢塊菌的耐鋅鎘基因TmZRC1S，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示。

2.含有權利要求1所述耐鋅鎘基因TmZRC1S的重組表達載體。

3.根據權利要求2所述的重組表達載體，其特征在與，所述重組表達載體還包括雙35S啟動子、GUS報告基因和帶內含子卡那霉素抗性標記基因。

4.如權利要求1所述來源于黑孢塊菌的耐鋅鎘基因TmZRC1S在培育耐鋅鎘植物中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述耐鋅鎘植物為擬南芥。

6.一種將所述來源于黑孢塊菌的耐鋅鎘基因TmZRC1S轉入擬南芥中的方法，包括如下步驟：

1）重組表達載體BH440的構建

利用BamHI和SacI對PCR產物進行雙酶切后，通過T4DNA連接酶將本發明合成的TmZRC1S基因與含有雙35S啟動子的植物表達載體pCAMBIA-1301連接，酶切鑒定和序列測定獲得了含有目的基因TmZRC1S的重組表達載體BH440；

2）電擊法轉化農桿菌

利用電擊法將構建好的重組表達載體BH440導入根癌農桿菌中，所述根癌農桿菌菌株為LBA4404；

3）農桿菌蘸花法轉化擬南芥

利用農桿菌蘸花法將導入TmZRC1S基因的根癌農桿菌轉化到擬南芥中，利用潮霉素進行轉化植株篩選，將在潮霉素板上正常生長的小苗進行移苗，收種，進行陽性苗鑒定。