[發(fā)明專利]一種精神分裂癥發(fā)育異常的皮層類器官模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110867058.6
• 申請日: 2021-07-29
• 公開（公告）號: CN113667633B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李濤;倪培艷
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學華西醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/02;C12Q1/02
• 代理公司: 成都高遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1. 一種誘導(dǎo)性多能干細胞在構(gòu)建精神分裂癥發(fā)育異常的皮層類器官模型中的用途；所述誘導(dǎo)性多能干細胞是由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏編號為CCTCC NO：C2021146的細胞株WD-FES1；

所述皮層類器官模型的構(gòu)建方法包括如下步驟：

(1) 將誘導(dǎo)性多能干細胞誘導(dǎo)成擬胚體；

(2) 將擬胚體培養(yǎng)形成RONAs；

(3) 將RONAs培養(yǎng)形成皮層類器官前體；

(4) 皮層類器官前體成熟為皮層類器官。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：

步驟(1)中，所述將誘導(dǎo)性多能干細胞誘導(dǎo)成擬胚體的具體方法為：將誘導(dǎo)性多能干細胞消化后轉(zhuǎn)移到低貼壁的培養(yǎng)板中，培養(yǎng)7天形成擬胚體；

和/或，步驟(2)中，所述將擬胚體培養(yǎng)形成RONAs的具體方法為：將擬胚體轉(zhuǎn)移到Matrigel包被的培養(yǎng)板中，使用含N2培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到具有典型神經(jīng)元特征的集落RONAs；

和/或，步驟(3)中，所述將RONAs培養(yǎng)形成皮層類器官前體的具體方法為：將RONAs消化為單細胞，使用HopCell?人皮層類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)液在低吸附培養(yǎng)板中培養(yǎng)，獲得皮層類器官前體；

和/或，步驟(4)中，所述皮層類器官前體成熟為皮層類器官的具體方法為：使用HopCell?人皮層類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)皮層類器官前體，每3-7天進行半量換液，直至分化成熟。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于：

步驟(1)中，所述消化使用含1mg/ml膠原酶的DMEM/F12培養(yǎng)基；

和/或，步驟(1)中，所述培養(yǎng)的培養(yǎng)基為Essential 8? 人iPSC培養(yǎng)基；

和/或，步驟(2)中，所述培養(yǎng)基為含N2的DMEM/F12培養(yǎng)基；

和/或，步驟(3)中，所述消化為1 ml/cm² Accutase在37℃消化5-10 min。

4.一種篩選治療精神分裂癥的藥物的方法，其特征在于：它包括如下步驟：

1）將誘導(dǎo)性多能干細胞構(gòu)建成精神分裂癥發(fā)育異常的皮層類器官模型；

2）將候選藥物分別施用于上述模型；

3）用上述模型評價潛在的治療精神分裂癥的藥物；

步驟1）中，所述誘導(dǎo)性多能干細胞是由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏編號為CCTCC NO：C2021146的細胞株WD-FES1；所述構(gòu)建精神分裂癥發(fā)育異常的皮層類器官模型的方法包括如下步驟：

(1) 將誘導(dǎo)性多能干細胞誘導(dǎo)成擬胚體；

(2) 將擬胚體培養(yǎng)形成RONAs；

(3) 將RONAs培養(yǎng)形成皮層類器官前體；

(4) 皮層類器官前體成熟為皮層類器官。