[發明專利]一種火龍果潰瘍病殺菌劑及其應用

在審

• 申請號: 202110863960.0
• 申請日: 2021-07-29
• 公開（公告）號: CN113652367A
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 唐燕瓊;高玉曉;馬香;劉柱;王丹;李宏;陳銀華;林敏
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/01;C12R1/11
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 侯華民

1.一種火龍果潰瘍病殺菌劑，其特征在于：包括耐硼賴氨酸芽孢桿菌發酵液、甘油和輔料；所述耐硼賴氨酸芽孢桿菌發酵液、甘油和輔料的質量比為1:(0.1～0.5):(10～20)混合而成；

所述耐硼賴氨酸芽孢桿菌發酵液是由硼賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusboronitolerans)于30～38℃下發酵培養，且菌液OD₆₀₀值為2.5以下所得的發酵產物。

2.如權利要求1所述的一種火龍果潰瘍病殺菌劑，其特征在于：所述耐硼賴氨酸芽孢桿菌發酵液的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：取耐硼賴氨酸芽孢桿菌單菌落，按接菌量為3～5％接種于LB液體培養基中，于35～37℃，以100～120r/min轉速恒溫搖床過夜培養；

步驟2：將步驟1的菌液，按體積比1:10接種至液體發酵培養基中，于30～34℃，以100～120r/min轉速恒溫搖床培養10～12h后，升溫至36～38℃誘導培養，同時，每2～3小時補加葡萄糖至發酵培養基中的葡萄糖濃度為10～15g/L，并調節pH為6.8～7.2，待OD₆₀₀值達到4.0以下；

步驟3：再將步驟2的菌液，按體積比2:5接種至LB液體培養基中，于36～38℃，以140～150r/min轉速恒溫搖床培養，待OD₆₀₀值達到2.5以下；

步驟4：收集發酵產物，以7500～8500r/min離心去除沉淀，獲得發酵上清液，經0.20～0.24μm的濾膜過濾發酵上清液，即，分別得到耐硼賴氨酸芽孢桿菌的發酵濾液。

3.如權利要求1所述的一種火龍果潰瘍病殺菌劑，其特征在于：所述發酵培養基由每1000ml水中添加胰蛋白胨15g，酵母粉3g，NaCl 1g，葡萄糖6g，NH ₄Cl 0.5g，MgSO₄ 0.05g，CaCl₂ 0.01g和NaH₂PO₄·2H₂O 1g混合而成，溶解后高壓滅菌。

4.如權利要求1所述的一種火龍果潰瘍病殺菌劑，其特征在于：所述殺菌劑還包括巨大芽孢桿菌發酵液，所述巨大芽孢桿菌發酵液與耐硼賴氨酸芽孢桿菌發酵液的質量比為(0.5～1):1。

5.如權利要求1所述的一種火龍果潰瘍病殺菌劑，其特征在于：所述巨大芽孢桿菌發酵液是由巨大芽孢桿菌發酵液(Bacillus megatherium)按接菌量3～5％接種于LB液體培養基中，于37℃下，以120r/min轉速恒溫搖床發酵培養，至菌液OD₆₀₀值為2.0～2.5所得的發酵產物。

6.如權利要求1所述的一種火龍果潰瘍病殺菌劑，其特征在于：所述輔料為水、液體培養基或固體培養基。

7.一種如權利要求1～6中任意一項所述的火龍果潰瘍病殺菌劑的應用，其特征在于，所述殺菌劑用于火龍果潰瘍病菌的防治中。

8.一種如權利要求7所述的火龍果潰瘍病殺菌劑的應用，其特征在于，所述殺菌劑在抑制新暗色柱節孢菌中的應用。