[發(fā)明專利]一種細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110856899.7
• 申請(qǐng)日: 2021-07-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113583949B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張黎敏;韓旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆西部賽澳生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 北京預(yù)立生科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11736
• 代理人: 李紅偉;孟祥斌

本發(fā)明公開(kāi)了一種細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用，所述培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加因子，所述添加因子包括多糖和/或低聚果糖，所述的多糖包括大分子蟲(chóng)草多糖GPS，所述的低聚果糖為雪蓮果提取低聚果糖。本發(fā)明還公開(kāi)了該培養(yǎng)基在培養(yǎng)干細(xì)胞中的應(yīng)用。本專利提供了一種用于培養(yǎng)干細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)基，解決了采用血清培養(yǎng)干細(xì)胞帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)問(wèn)題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞，可被誘導(dǎo)分化成多種類型的特化細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)組織的修復(fù)與再生。理論上講，在一定條件下，它可以定向分化成機(jī)體內(nèi)的功能細(xì)胞，形成任何類型的組織和器官。干細(xì)胞從發(fā)育學(xué)角度，可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞兩類，胚胎干細(xì)胞是一種高度未分化的細(xì)胞，它能分化成生命體的所有組織與器官。成體干細(xì)胞存在于成熟生命體的一些組織或器官中，具有修復(fù)和再生的能力。從分化潛能的角度上，干細(xì)胞分為全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞。全能干細(xì)胞是指具有能分化成完整個(gè)體的潛能的干細(xì)胞；多能干細(xì)胞是有分化成多種類型細(xì)胞的能力。單能干細(xì)胞一般存在于成體組織器官中，能向單一方向分化，產(chǎn)生一種類型的細(xì)胞。由組織工程等發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞療法、組織代替治療方法以及基因治療是當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域乃至生命科學(xué)領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)和前沿，為患者提供了有效的治療方案。具有高度自我更新潛能和多分化方向的干細(xì)胞是細(xì)胞治療和基因治療的首選靶細(xì)胞。

干細(xì)胞的臨床應(yīng)用必然要面對(duì)一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)——細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴(kuò)增，細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要最大限度的為細(xì)胞提供一個(gè)接近于其體內(nèi)生長(zhǎng)的環(huán)境，所以大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中，科研工作者都會(huì)提供類似體液環(huán)境的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、模擬體內(nèi)環(huán)境的溫度和二氧化碳濃度等條件，還有最重要的就是為細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖提供必要的養(yǎng)分，故需要添加胎牛血清來(lái)供給營(yíng)養(yǎng)。為細(xì)胞生長(zhǎng)增殖提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是胎牛血清最主要的功能，同時(shí)，它還存在一些缺陷，比如動(dòng)物血清極易攜帶病毒或支原體、成分復(fù)雜、批件差異大，不利于進(jìn)行細(xì)胞穩(wěn)定培養(yǎng)。還有一方面，血清的價(jià)格很昂貴，會(huì)存在供不應(yīng)求，缺少固定的來(lái)源等一些問(wèn)題。而在干細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中，血清中不確定的成分及配比更是會(huì)導(dǎo)致干細(xì)胞的干性丟失并走向分化，所以我國(guó)也在《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則(試行)》中明確說(shuō)明在干細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系中應(yīng)盡量避免使用動(dòng)物血清。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種無(wú)血清的干細(xì)胞增殖用培養(yǎng)基。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

本發(fā)明第一方面提供了一種細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述的細(xì)胞培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加因子，所述的添加因子包括多糖和/或低聚果糖，優(yōu)選多糖和低聚果糖。

進(jìn)一步，所述的多糖包括富硒海藻多糖。

進(jìn)一步，所述的富硒海藻多糖的濃度為25～35μg/mL。

本文所用的術(shù)語(yǔ)“低聚果糖”是指果糖低聚物。其可為長(zhǎng)鏈或短鏈，具體取決于低聚果糖的聚合度(單體的數(shù)量)。

進(jìn)一步，所述的低聚果糖為雪蓮果提取低聚果糖。

進(jìn)一步，所述的雪蓮果提取低聚果糖的濃度為45～55μg/mL。

進(jìn)一步，所述的多糖還包括蟲(chóng)草多糖。

進(jìn)一步，所述的蟲(chóng)草多糖的濃度為8～12μg/mL。

進(jìn)一步，所述的添加因子還包括胰島素、L-谷氨酰胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖粘連蛋白、白蛋白、EGF、b-FGF、VEGF、PDGF-BB、IL-3、維生素B6、維生素B12和/或維生素C，優(yōu)選為胰島素、L-谷氨酰胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖粘連蛋白、白蛋白、EGF、b-FGF、VEGF、PDGF-BB、IL-3、維生素B6、維生素B12和維生素C。

進(jìn)一步，所述的胰島素的濃度為8～12μg/mL。

進(jìn)一步，所述的L-谷氨酰胺的濃度為8～12mM。