[發明專利]一種檢測試劑盒、檢測工具及其在預測阿爾茲海默病中的用途

在審

• 申請號: 202110853358.9
• 申請日: 2021-07-27
• 公開（公告）號: CN115678981A
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 請求不公布姓名
• 申請（專利權）人: 蘇州熵道生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇立泰律師事務所 32423
• 代理人: 金俊江;張少坤

本發明涉及一種生物技術領域，尤指一種阿爾茨海默病預測標志物檢測試劑盒。該試劑盒可以檢測研究報道與阿爾茨海默病相關的口腔微生物，包括細菌(牙齦卟啉單胞菌、幽門螺桿菌、福賽坦氏菌、普氏桿菌、具核梭桿菌、螺旋體)、病毒(單純皰疹病毒1型、巨細胞病毒、人類皰疹病毒6型、EB病毒)和真菌（白色假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌）。檢測方法是：從牙齦下方采集的樣本提取DNA，文庫制備，運用下一代測序（NGS)技術進行宏基因組測序分析。本發明之一種阿爾茨海默病預測標志物檢測試劑盒能一次性檢測出口腔所有的微生物，具有簡便、高效、準確等優點，有利于對阿爾茨海默病的早期預防治療，具有很大的臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種阿爾茨海默病預測標志物檢測試劑盒與檢測工具。

背景技術

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種起病隱襲、呈進行性發展的神經退行性疾病，臨床特征主要為認知障礙、精神行為異常和社會生活功能減退。阿爾茨海默病在65歲以上的人群中發病率最高，隨著我國人口老齡化的進展，若沒有很好的治療方法，預計在未來幾十年阿爾茨海默病的增加比例將更加迅速，將導致家庭和社會承擔巨大的經濟負擔。目前尚無治愈阿爾茨海默病的有效手段。阿爾茨海默病的癥狀進展緩慢，并隨著時間逐漸惡化。因此，發現經濟、方便的阿爾茨海默病預測標志物對于提供更好的阻礙阿爾茨海默病進展的機會是至關重要的。有研究報道β-淀粉樣蛋白積聚形成的有毒斑塊導致了阿爾茨海默癥，且多項證據表明，阿爾茨海默病患者大腦中Aβ和tau蛋白的異常積累早在癡呆癥狀出現前年即已經開始。

近年來的研究已經證實，人體內共生微生物種類與數量與阿爾茨海默病的發生與發展密切相關，中國專利申請CN201880066002.7公開了一種通過細菌宏基因組分析來診斷阿爾茨海默氏癥的方法，其使用人體血液樣品，對細菌的細胞外囊泡進行宏基因組分析來預測輕度認知障礙和阿爾茨海默氏癥發作的風險，可早期診斷和預測阿爾茨海默氏癥風險群體以利用適當的治愈延遲該疾病發作的時間或防止該疾病發作，并且在該疾病發作之后，可進行早期診斷，從而降低阿爾茨海默氏癥的發生率并提高治療效果。然而該技術存在以下的缺陷：一、由于檢測樣本為血液，必須采用介入式采集方式，無法在短期內進行多次測量，從而增加了單次檢測假陽性的風險，提高了誤診的發生率；二、檢測對象是人體血液樣本的細胞外囊泡，樣本處理操作復雜，成本高；三、檢測的標志物僅針對各種不同種屬細菌的細胞外囊泡，指標相對單一，如果出現菌群失調情況，可能導致檢測結果不準確，從而增加誤診的可能。

本研究團隊發現阿爾茨海默病患者的大腦中存在多種口腔致病微生物種群，如：細菌(牙齦卟啉單胞菌、幽門螺桿菌、福賽坦氏菌、普氏桿菌、具核梭桿菌、螺旋體)、病毒(單純皰疹病毒1型、巨細胞病毒、人類皰疹病毒6型、EB病毒)和真菌(白色假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌)，如附圖1所示，這些口腔微生物種群可因感染、外傷或醫源性因素進入血液，突破血腦屏障直接進入大腦，產生有毒物質引起炎癥反應，進一步引起Aβ沉積、tau 蛋白過磷酸化，最終對神經元產生不可逆損傷甚至導致神經元凋亡。口腔樣本采集方便，但鑒于口腔微生物種類繁多且口腔微生物種群隨環境變化、食品衛生等外界因素波動幅度較大，檢測結果偏差較大，易產生假陽性，因此制約著利用口腔微生物檢測阿爾茨海默病患病風險的技術發展。

有鑒于此，針對上述技術問題，本發明提出一種設計合理、采樣便捷、便于持續動態監測且精確度更高的阿爾茨海默病預測標志物檢測試劑盒和檢測方法。

發明內容

為了解決上述問題，本發明利用宏基因組測序，可以檢測口腔中存在的所有穩定微生物，從而獲得測試樣本與阿爾茨海默病相關的全面信息。

具體技術方案是：

本發明在第一方面涉及用于選擇自口腔穩定微生物中的AD生物標志物的檢測工具在制備通過包括以下的方法診斷受試者中的阿爾茲海默癥(AD)或確定受試者中發生阿爾茲海默癥(AD) 的風險的試劑或試劑盒中的用途：

(1)口腔穩定微生物樣本獲取

(2)樣本基因文庫制備與擴增；