[發明專利]一種醛基修飾的瓊脂糖介質的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202110851945.4
• 申請日: 2021-07-27
• 公開（公告）號: CN113563624A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 董垚
• 申請（專利權）人: 武漢新菲生物科技有限公司
• 主分類號: C08J7/12
• 分類號: C08J7/12;C07K1/14;C07K1/22;C08L5/12
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 王昌亮

本發明提出了一種醛基修飾的瓊脂糖介質的制備方法，步驟如下：瓊脂糖小球與多聚甲醛修飾劑進行反應，得到醛基修飾的瓊脂糖介質；進一步將醛基修飾的瓊脂糖介質與乙二胺或三聚氰胺偶聯，得到交聯的瓊脂糖醛基介質。本發明采用多聚甲醛和乙二胺/三聚氰胺偶聯在瓊脂糖凝膠表面和內部，使瓊脂糖之間的高分子鏈增多，提高了瓊脂糖空間結合能力和機械強度，從而避免了蛋白或化學物質會緊貼瓊脂糖的表面，空間位阻遮蔽的現象發生。本發明制備方法簡單，增加了交聯后液體流速，且純化速度和效果得到很大提升。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種醛基修飾的瓊脂糖介質的制備方法及應用。

背景技術

生物醫藥和檢測領域會用到大量的純化介質，純化介質中最常使用的生物材料是瓊脂糖。瓊脂糖鏈依靠分子內和分子間氫鍵及其它力的作用使其相互盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構成大網孔型凝膠，具有很好的生物相容性及多孔性。

瓊脂糖材料作為載體，在其分子表面通過化學反應連接活性分子，使其具有相應的功能。第一種常用的化學修飾有陰離子(磺酸基團)，陽離子(季銨鹽)，使其在不同酸堿環境下帶有正負電荷，來吸附需要的化學或者有機大分子。還可以連接上芳香烴類，使其變成疏水結合能力的介質。第二種常用修飾為具有偶聯能力的分子，可以和羥基(OH-)、氨基(NH₂-)、巰基(SH-)形成穩定的共價鍵結合，把被偶聯的分子，蛋白等物質固定在介質表面。

現有技術中，常采用高碘酸氧化瓊脂糖生成醛來結合氨基球生產瓊脂糖球的方法，上述方法修飾的醛基團只有一個C鏈長度，所綁定的蛋白或化學物質會緊貼瓊脂糖的表面，會導致空間位阻遮蔽，影響抗體或蛋白的結合，導致純化效果差。

發明內容

有鑒于此，本發明提出了一種純化效果好、純化速度快的一種新型醛基修飾的瓊脂糖介質的生產方法。

本發明的技術方案是這樣實現的：

一方面，本發明提供了一種醛基修飾的瓊脂糖介質的制備方法，包括如下步驟：

S1，配制多聚甲醛修飾劑；

S2，將瓊脂糖小球加入多聚甲醛修飾劑中進行反應，得到多聚甲醛修飾的瓊脂糖介質。

在以上技術方案的基礎上，優選的，步驟S1中，多聚甲醛修飾劑以體積百分比為100％計算，包括10-30％甲醇，3-8％多聚甲醛，1-3％pH值為1.5-3.5的酸性緩沖液，余量為水；

在以上技術方案的基礎上，優選的，多聚甲醛修飾劑的制備方法為：將多聚甲醛溶于水中，然后依次加入甲醇和酸性緩沖液，攪拌均勻后得到多聚甲醛修飾劑。

在以上技術方案的基礎上，優選的，步驟S2中，瓊脂糖小球的制備方法為：將粒徑為90-120μm，體積濃度為4-8％的瓊脂糖小球用體積濃度為1-3％pH值為1.5-3.5的酸性緩沖液沖洗，去除保存液乙醇，得到干凈的瓊脂糖小球；

在以上技術方案的基礎上，優選的，步驟S2的反應過程為：將瓊脂糖小球加入多聚甲醛修飾劑中，在60-70℃條件下水浴反應30-40min，然后將反應液溫度降至4-10℃；其中瓊脂糖小球和多聚甲醛修飾劑的質量比為瓊脂糖:多聚甲醛修飾劑＝1:(0.5-3)。

在以上技術方案的基礎上，優選的，還包括步驟S3，用10％甲醇水溶液沖洗反應后的瓊脂糖小球，得到多聚甲醛修飾的瓊脂糖介質。

在以上技術方案的基礎上，優選的，還包括步驟S4：將步驟S2制備的多聚甲醛修飾的瓊脂糖介質加入多氨基化合物中，經偶聯反應后得到交聯氨基的瓊脂糖介質。

在以上技術方案基礎上，優選的，所述多氨基化合物為乙二胺或三聚氰胺。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述偶聯反應包括如下步驟：